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肿瘤的基因治疗即是将目的基因用基因技术导入靶细胞,并使其表达、执行或介导对肿瘤的杀伤和抑制作用,从而达到治疗之目的。选择合适的载体一直是肿瘤基因治疗研究中的重点。鼠伤寒沙门菌是一种兼性厌氧菌,它可以在乏氧的肿瘤组织内聚集和繁殖,且聚集在肿瘤部位(包括转移灶)的数量是正常组织的1000倍。它与宿主之间的反应通过Ⅲ型分泌机制介导,这种机制使细菌的效应蛋白能直接转移到真核细胞发挥作用,使其可以传递表达效应基因并同时表达多种治疗性蛋白。以上两种特性为沙门菌用作肿瘤基因治疗的靶向载体提供了可能。而近年来迅速发展的基因工程技术能将沙门菌的致病基因敲除后得到减毒菌株,为安全性提供了保证。本实验采用细菌导向的前药酶疗法,利用沙门菌选择性定植于肿瘤组织从而将前药活化酶基因靶向转运至肿瘤组织内表达,通过全身运用无毒性的前药,使前药仅能在肿瘤组织内被活化成具有抗癌活性的药物,从而达到杀死肿瘤细胞并减少抗癌活性药物对正常组织的影响。第一部分的主要内容为利用减毒沙门菌VNP20009构建新型载体ST-CD菌株。首先通过Red同源重组技术,获得了营养缺陷菌株ST/Δasd,然后构建pAsd-CD质粒,将质粒导入营养缺陷菌株ST/Δasd,最后成功筛选并鉴定出新型载体ST-CD菌株。经检测ST-CD菌株可将外源性5-氟胞嘧啶转化为5-氟尿嘧啶。第二部分的主要内容为检测新型载体ST-CD菌株的低毒性和靶向性。分别将ST-CD菌株和野生沙门菌自小鼠尾静脉注入体内,发现接受ST-CD的小鼠没有死亡,而接受野生沙门菌的小鼠4天后全部死亡；将ST-CD注入MFC小鼠体内,发现第6天时肿瘤/肝脏的菌量比约为1020：l。说明新型载体ST-CD具有良好的低毒性和肿瘤靶向性。第三部分的主要内容为将新型载体ST-CD注入MFC小鼠体内并在小鼠腹腔内注射5-氟胞嘧啶,观察肿瘤生长情况。结果发现和对照组相比,ST-CD/5-Fc系统有着良好的抑瘤效果,其抑制肿瘤生长的原因可能与ERK表达受抑制有关。