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目的:本课题以自体移植的造模法制备子宫内膜异位症模型大鼠作为研究对象,采用ELISA、免疫组化和Western bloting技术检测该信号通路关键蛋白及其磷酸化在宫腔中的表达规律。拟从Wnt/β-catenin信号通路关键分子角度揭示少腹逐瘀汤对EMT痛经的干预效应,为该复方临床应用提供理论支撑。方法:按随机分组法将70只Wistar大鼠分为空白组(假手术组)11只,手术组55只,采用自体移植法制成EMT大鼠模型。另造模4只,肉眼及镜下观察,以验证造模成功与否。将造模组大鼠按随机数字表法分为模型组、少腹逐瘀汤高剂量组、中剂量组、低剂量组及阳性药物组,各11只。空白组及模型组大鼠均用蒸馏水灌胃,少腹逐瘀汤高、中、低各剂量组分别用不同浓度灌胃,阳性药物组予以痛经宝颗粒灌胃;六组均每日1次,给药28天。灌药结束后取材,光学显微镜下观察大鼠异位内膜组织结构的变化,并运用ELISA实验法检测大鼠血清5-HT、NO、PGF2α的含量;免疫组化法测异位组织Wnt、GSK-3β、TCF4蛋白的表达;Western bloting检测异位内膜组织Frizzled、P-β-catenin、β-catenin蛋白的含量。结果:(1)各组大鼠病理组织学变化:空白组子宫内膜上皮结构连续完整,间质细胞排列紧密,腺体结构清晰;与空白组相比,模型组内膜上皮组织破坏,产生大量的炎性细胞,以淋巴细胞和中性粒细胞为主;与模型组相比,少腹逐瘀汤各剂量组随着药物浓度的增加,子宫内膜厚度逐渐减小,子宫逐渐萎缩,血管数量和炎症细胞的浸润数量明显减低;阳性药组子宫内膜开始萎缩,炎症细胞的浸润得到有效遏制,血管生成减少。(2)免疫组化:与空白组相比,模型组大鼠异位组织中Wnt、TCF4蛋白的表达量均显著升高,GSK-3β表达量下降,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,少腹逐瘀汤各剂量组和阳性药物组Wnt、TCF4蛋白表达量均下降,GSK-3β表达量提高,差异有统计学意义(P<0.01);与阳性药物组相比,少腹逐瘀汤低、中剂量组Wnt、TCF4蛋白及低剂量组GSK-3β有统计学意义(P<0.01),而少腹逐瘀汤高剂量组与阳性药物组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)各组大鼠血清5-HT、NO、PGF2α含量的变化:与空白组相比,模型组的含量均明显升高;与模型组比较,少腹逐瘀汤各剂量组及阳性药物组大鼠血清5-HT、NO、PGF2α含量下降,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);且少腹逐瘀汤低、中剂量组大鼠血清5-HT、NO、PGF2α含量变化与阳性药物组相比,差异具有统计学意义(P<0.01),少腹逐瘀汤高剂量组血清5-HT、NO与阳性药物组相比,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。(4)各组大鼠异位组织中Frizzled、P-β-catenin、β-catenin蛋白的含量变化:与空白组相比,模型组Frizzled、β-catentin蛋白表达量均显著升高,P-β-catentin蛋白表达量呈现下降趋势,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,少腹逐瘀汤低、中、高剂量组Frizzled、β-catentin蛋白表达量均下降,P-β-catenin蛋白表达量升高,其中高剂量组有统计学差异(P<0.01);与阳性药物组相比,少腹逐瘀汤低、中剂量组Frizzled、P-β-catentin蛋白表达量有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。β-catentin蛋白表达量变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:少腹逐瘀汤通过对Wnt/β-catenin信号通路关键分子之间的级联激发效应,有效降低该信号通路关键分子基因蛋白及其磷酸化在宫腔中的表达量,从而使异位内膜种植、侵袭能力减弱,EMT大鼠的症状减轻,最终为少腹逐瘀汤治疗EMT提供新的理论依据。