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研究目的分析增生性瘢痕与正常皮肤组织来源成纤维细胞中氧化应激相关通路及部分细胞因子的差异;探讨脂肪来源间充质干细胞对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、迁移、凋亡能力以及氧化应激相关通路的部分细胞因子含量的影响,观察瘢痕内注射脂肪来源间充质干细胞（Adipose Derived Mensenchymal Stem Cells,ADSCs）对人增生性瘢痕裸鼠移植模型的治疗效果,以期为脂肪来源间充质干细胞治疗增生性瘢痕的相关作用机制提供理论基础。研究方法1.用组织块贴壁法提取并培养原代人增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤来源成纤维细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞内活性氧含量,比色法检测细胞内总超氧化物歧化酶活力,RT-PCR法检测细胞Nrf2、NQO1 m RNA相对表达量,蛋白免疫印迹实验检测两组细胞中Nrf2、Bcl2蛋白表达情况,细胞免疫组化染色检测Nrf2在两种细胞中的分布及表达;2.提取并培养原代人脂肪来源间充质干细胞,流式细胞术检测其表面标志物,并检测其成骨、成脂、成软骨分化潜力;将脂肪来源间充质干细胞和增生性瘢痕成纤维细胞按照0.5:1、1:1、2:1的细胞数量共培养,对照组用等量不含血清的F12培养基培养,培养过程中用CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力。共培养48小时后收集成纤维细胞行以下检测:流式细胞术检测细胞内活性氧含量和细胞凋亡情况,比色法检测细胞内总超氧化物歧化酶活力,RT-PCR法检测细胞Keap1、Nrf2、NQO1 m RNA相对表达量,蛋白免疫印迹实验检测细胞中Nrf2、Bcl2、BAX、HO-1蛋白表达情况。3.获取人增生性瘢痕组织,选取6只6-8周雌性裸鼠并建立人增生性瘢痕裸鼠移植模型,每只鼠背部移植4块人增生性瘢痕组织,一块为空白对照,其余三块分别注射0.2ml脂肪来源间充质干细胞、曲安奈德和F12培养液,于治疗28天收集裸鼠背部移植组织并行瘢痕重量、组织病理学和蛋白含量检测观察瘢痕转归;研究结果1.与正常皮肤组织来源成纤维细胞相比,增生性瘢痕成纤维细胞增殖较快,活性氧含量更高,总超氧化物歧化酶活力较高,Nrf2和NQO1 m RNA表达量均降低,Nrf2和Bcl2蛋白含量也较低,且检测到Nrf2在两组细胞中的细胞核和细胞质中均有表达。2.提取并培养脂肪来源间充质干细胞,流式细胞术检测其表面标志物CD90（99.68%）、CD73（98.73%）、CD105（99.85%）、CD45（0.47%）、CD31（0.45%）、CD34（4.77%）,且具有成骨、成脂、成软骨三向分化能力。共培养后,成纤维细胞的增殖和迁移能力下降,细胞内活性氧含量升高,细胞凋亡增加,总超氧化物歧化酶活力降低,Nrf2、NQO1 m RNA相对表达量均明显降低,Nrf2、Bcl2、HO-1蛋白表达较对照组也明显下降,Bax蛋白含量升高。3.瘢痕内注射脂肪来源间充质干细胞有一定疗效,且可以改善瘢痕胶原堆积、排列不齐等组织学特征,治疗后组织内的Nrf2蛋白含量降低。研究结论1.相较于正常皮肤成纤维细胞,增生性瘢痕成纤维细胞具有更强的增殖、迁移能力,且细胞内氧化应激水平也更高;2.成功提取原代人脂肪来源间充质干细胞,流式检测其表面标志物表达符合国际干细胞协会标准,且具有三向分化潜能;增生性瘢痕成纤维细胞与脂肪来源间充质细胞共培养可以降低成纤维细胞的增殖和迁移能力,并降低细胞内抗氧化基因和抗氧化酶的表达,提高成纤维细胞氧化应激程度,促进细胞凋亡,这可能是脂肪来源间充质干细胞治疗增生性瘢痕的机制之一。3.成功构建人增生性瘢痕裸鼠移植模型,发现脂肪来源间充质干细胞瘢痕内注射对增生性瘢痕有一定的治疗效果,且可以改善瘢痕胶原堆积、排列不齐等组织学特征,疗效可能与Nrf2含量降低有关;