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第一部分:SNHG12在肝癌中的表达及其临床意义目的:本部分研究旨在观察长链非编码RNASNHG12在原发性肝癌中(HCC)的表达,SNHG12的表达与患者临床预后的关系。方法:RT-qPCR技术检测SNHG12在原发性肝癌组织与癌旁组织中的表达差异;技术原位杂交(ISH)、技术进一步验证SNHG12在原发性肝癌组织与癌旁组织中的表达差异;RT-qPCR技术分析SNHG12在不同肿瘤直径、不同Edmondson-Steiner分级中的表达差异;HE染色分析SNHG12的表达水平与Edmondson-Steiner分级之间的关系;结合HCC患者临床及生存资料,卡方检验分析SNHG12的表达与HCC患者临床病理学资料的相关性;Kaplan-Meier分析SNHG12表达高低与患者生存率及无复发生存率之间的关系;结果:肝癌组织中SNHG12表达水平(2.94±0.88)较癌旁组织(1.61±0.53)明显上调(P<0.01)。肿瘤直径>5cm的肝癌患者SNHG12表达水平(4.02±0.28)明显高于肿瘤直径彡5cm的肝癌患者SNHG12表达水平(2.59±0.39),(P<0.01)。肝癌患者Edmondson-Steiner分级越高,SNHG12表达量越高,(P<0.01。SNHG12表达与肿瘤直径(P<0.01)、Edmonson-Steineir分级(P<0.01)、转移(P=0.031)密切相关,高表达SNHG12肝癌患者5年生存率明显低于SNHG12低表达患者(P<0.01),高表达SNHG12肝癌患者5年复发率显著高于SNHG12低表达患者(P<0.01)。结论:SNHG12在肝细胞肝癌组织中表达明显上调,可能参与了肝癌的发生、发展过程,SNHG12可以作为HCC患者预后不良的潜在预警指标。第二部分:SNHG12促进肝癌转移的分子机制目的:本部分研究旨在探讨SNHG12对肝癌细胞侵袭转移的影响及SNHG12促进肝癌转移可能的分子机制。方法:利用RNA干扰技术在肝癌细胞HepG2中沉默SNHG12,Transwell侵袭实验、MTT实验、细胞划痕实验分别观察肝癌细胞侵袭、生长迁移能力的变化。Western blotting实验技术检测干扰SNHG12细胞水平TGF-β/Smad通路关键分子的改变。结果:Transwell细胞侵袭实验显示:与对照组相比,干扰SNHG12HepG2侵袭能力明显减弱,差异具有统计学意义(p<0.05)。MTT实验示:干扰SNHG12 HepG2生长能力明显下降,差异具有统计学意义(p<0.05)。此外,Western blotting显示:与对照组相比,干扰SNHG12与侵袭密切相关的蛋白:血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达明显下调。细胞划痕实验显示:沉默SNHG12肝癌细胞HepG2迁移能力较对照组明显降低。Westernblotting实验显示:干扰SNHG12 TGF-β/Smad通路TGF-β1表达明显下调,Smad7表达明显上调。总Smad2/3(T-Smad2/3)未见明显改变,磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)水平明显下调。结论:SNHG12通过TGF-β/Smad通路调控肝癌细胞的侵袭。