论文部分内容阅读
丝裂素活化的蛋白激酶（MAPK）级联是信号从细胞外转导到细胞核内的重要传递者。细胞运用这一级联激活细胞内分子，参与信号转导，从而参加和影响多种生理病理过程。p38MAPK为近年来发现的一类新的MAPK亚族，参与了细胞的存活、分化和凋亡等过程。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）可以激活p38MAPK通路，但活化后的p38MAPK在细胞凋亡中的作用还不明确。同时，p38MAPK可以上调TNF-α的表达，进而诱导细胞凋亡。胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，其浸润性生长、侵袭性强、早期转移和易复发的特点，可能与肿瘤细胞信号转导异常有关。p38MAPK通路在胶质瘤发生发展过程中的作用及其与TNF-α共同调控胶质瘤生长周期的作用尚不清楚。 本研究的目的：（1）研究p38MAPK基因转染C6细胞后对其生长状态和生长周期的影响；（2）研究TNF-α对C6细胞增殖的抑制作用和对p38MAPK表达的影响；（3）初步探讨p38MAPK影响C6细胞生长周期的作用机制。 方法：（1）利用脂质体介导法将p38MAPK基因导入C6细胞中，用免疫细胞化学染色和Western-blot检测其在转染前后的表达情况，用苏木精-伊红（HE）染色、透射电镜（TEM）和流式细胞仪等方法研究其对细 第四军医大学硕土学位论文 摘要 胞形态和生长周期的影响；（2）应用MTT法研究经M－a处理的C6细 胞的增殖活性，采用TEM和流式细胞仪观察是否发生凋亡，应用免疫细 胞化学染色和 Western七lot检测 p38MAPK表达；臼）用酶连免疫吸附实 验（ELISA）检测转染p38MAPK前后细胞培养液中sM咀水平的变化， 用流式细胞仪检测膜TNF．a和肿瘤坏死因子受体1（MAI）水平的变化。 结果：门）转染休MV 5巾SMAJ，K组P38 MM APAPK蛋白表达阳性，细 胞形态发生变化，贴壁性降低，出现大量凋亡细胞；u）TN’F叱 X iU几） 对C6细胞增殖的抑制率为4375％，TEM下可见凋亡细胞，流式细胞仪 检测凋亡率为 37．5％，免疫细胞化学染色和 Western．blot 分析显示 网SMAPK表达阳性：（）转染／MV 5个8＊AP K组细胞培养液中＊TN卜 a水平明显升高，膜TNF．a水平无明显变化，膜TN’－－AI表达升高。 结论：门）转染pSMAPK基因可诱导o细胞凋亡；u）TN’F－。能 诱导 C6细胞凋亡和 p38M”K表达。p38M”K的活化可能与 C6细胞凋 亡有关；u）…SMAPK可能通过上调引下压、和膜TNF m水平而诱导C6 细胞凋亡。