C.albicans感染中MBL浓度改变以及Treg细胞的表达分析

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背景白假丝酵母菌(Candida albicans, C. albicans)是临床上最常见的感染性真菌,甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin, MBL)是由肝细胞分泌的血浆蛋白,属于C型凝集素超家族中胶凝素家族成员,是天然免疫系统中一个关键的可溶性PRR,被称为“天然免疫系统中的关键分子”。调节性T细胞(Tregs)其表型为CD4+CD25+ Foxp3+,占CD4+T细胞总数的5%~15%,是体内具有免疫调节功能的CD4+T细胞亚群。我们课题组前期研究证明,MBL对C.albicans相态转化及其诱导的免疫应答具有调节作用,那么在C.albicans感染患者的血浆中,MBL浓度如何改变?以及Treg细胞表达如何变化?二者是否存在相关性?则需要进一步深入研究。该研究将进一步揭示MBL在抗C.albicans感染免疫应答中的调节作用。本研究首先收集临床上C.albicans感染患者及健康对照者的外周血液标本,进一步采用ELISA检测血浆中MBL浓度,用流式细胞术分析PBMC中Treg细胞的表达,RT-PCR分析Treg细胞特异性转录因子Foxp3的表达情况,最后采用ELISA检测Treg细胞炎性因子IL-1β的表达水平水平。结果显示,与健康对照组相比,C. albicans感染的患者血浆MBL浓度显著升高,且在C. albicans感染患者PBMC中Treg细胞的表达明显增加,Treg细胞特异性转录因子Foxp3的表达明显增强,Treg细胞相关炎性因子IL-1p水平分泌也同样升高。上述结果显示,在C. albicans感染时,MBL浓度升高,Treg细胞表达升高。提示,在C. albicans感染时,MBL浓度的改变与Treg细胞表达水平存在相关性。该研究为临床C. albicans感染的防治提供新的理论依据和新的靶点。目的分析C.albicans感染患者血浆MBL浓度的改变以及Treg细胞表达的情况。方法1.收集临床标本并检测其MBL浓度:按照纳入标准收集C. albicans感染患者及健康对照者外周血液标本各20例,ELISA检测C.albicans感染患者及健康对照者外周血MBL水平。2.流式分析Treg细胞:收集每例血液标本,加入FITC-抗CD4和PDC-抗CD25及PE-抗Foxp3单克隆抗体,流式细胞术分析Treg细胞表达情况。3. ELISA检测IL-1β的水平:ELISA检测C.albicans感染患者及健康对照者外周血炎性细胞因子IL-1p的水平。4. RT-PCR分析Foxp3的表达:RT-PCR分析C.albicans感染组及健康对照组Treg细胞特异性转录因子Foxp3的表达情况。5.统计学分析:根据得出的数据资料(x±S)进行统计分析。采用SPSS 19.0进行分析,多个样本均数比较采用One-way ANOVA检验,以P<0.05为差异具有统计意义。结果1.20例患者平均MBL血清浓度为1.893μg/ml,20例对照组平均MBL血清浓度为1.310μg/ml,两者对比有统计学意义(P<0.05),显示C.albicans感染的患者血浆MBL浓度显著升高。2. C.albicans I感染的患者外周血PBMC中CD4+ CD25+ Foxp3+细胞百分率较健康对照组有显著升高(P<0.05),提示Treg细胞数量在C. albicans感染患者PBMC中的比例增加。3.与健康对照组相比,C.albicans感染的患者血浆中Treg细胞炎性因子IL-1β水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),提示C.albicans感染时Treg细胞反应性增强。4. C.albicans感染的患者Foxp3表达高于健康对照组(P<0.05),提示Treg细胞特异性转录因子Foxp3在C.albicans感染患者PBMC中的表达增强。结论在C.albicans感染时,MBL浓度显著升高,Treg细胞的表达同样升高。
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