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研究背景: 炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是病因尚不明确的慢性非特异性炎症性疾病,包括克罗恩病(Crohns disease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)。近年来在亚洲特别是中国的发病率逐渐增高,众多证据表明肠道屏障功能在IBD中起重要的作用,抑瘤素M(Oncostatin M,OSM)可增加细胞增殖,修复肠道上皮,并且PGE2可诱导OSM的产生。然而OSM在IBD中的作用,及选择性 COX-2 抑制剂是否可调节 OSM的表达并且影响结肠炎的严重程度值得进一步的研究。 目的: 建立 IBD 动物模型,应用选择性 COX-2 抑制剂塞来昔布对其进行干预,检测血清中TNF-α、IFN-γ的水平,行疾病活动指数及组织学损伤指数评分评价疾病炎症程度,检测小鼠结肠组织中OSM、COX-2、STAT3和pSTAT3在蛋白水平的表达。探究选择性COX-2抑制剂对OSM的调节及OSM在结肠炎中的作用。 方法: SPF级,6-8周雄性C57BL/6小鼠48只,随机分为4组。(1)正常对照组:自由进食水,不进行干预。(2)DSS模型组:自由饮用2.5%DSS溶液,共8天,按每只小鼠每天需要 5ml的饮水量来配制,每两日更换一次 DSS 溶液,自由进食。(3)DSS +塞来昔布组:在自由饮用2.5%DSS溶液基础上,于第3天开始给予塞来昔布(Celecoxib)15mg/kg/d 灌胃。(4)塞来昔布组:自由进食水,于实验开始第 3 天给予塞来昔布 15mg/kg/d 灌胃。每只小鼠每日监测体重变化,观察小鼠大便性状及是否大便带血,进行疾病活动度(disease activity index,DAI)评分,于第8天脱颈处死,眼球取血法取血行ELISA检测TNF-α、IFN-γ水平,取结肠组织做HE染色行组织学损伤指数(Histological index,HI)评分;免疫组织化学法检测结肠组织中OSM、COX-2的表达;Western Blot检测肠道组织中OSM、COX-2、STAT3及pSTAT3蛋白的表达。 实验结果用 SPSS 22.0 统计学软件分析,数据使用均数±标准差描述,所有数据进行方差齐性分析(Levene),多组数据采用单因素方差分析(ANOVA),方差分析有意义者进行两两比较(Bonferroni),P<0.05 表示差异有统计学意义。 结果: 各组小鼠结肠炎DAI评分:与正常对照组相比,DSS模型组出现体重下降,腹泻及血便。DSS+塞来昔布组症状较DSS模型组重。DSS模型组高于正常对照组(P<0.05),DSS+塞来昔布组高于 DSS模型组(P<0.05)。塞来昔布组与正常对照组无明显差异。各组HI评分:与正常对照组相比,DSS模型组结肠粘膜充血水肿,上皮细胞损伤、溃疡,腺体结构不同程度的消失,隐窝变形、破坏,炎性细胞浸润。DSS+塞来昔布组镜下表现较DSS模型组更重。DSS模型组高于正常对照组(P<0.05),DSS+塞来昔布组高于 DSS 模型组(P<0.05)。塞来昔布组与正常对照组无明显差异。ELISA 检测各组血清中 TNF-α、IFN-γ的表达:DSS模型组高于正常对照组(P<0.05),DSS+塞来昔布组高于DSS模型组(P<0.05),塞来昔布组与正常对照组无差异(P>0.05)。 免疫组织化学检测肠道组织中OSM、COX-2的表达: DSS模型组高于正常对照组(P<0.05),DSS+塞来昔布组低于 DSS 模型组(P<0.05),塞来昔布组与正常对照组无差异。Western Blot检测肠道组织OSM、COX-2、STAT3和pSTAT3的表达:DSS模型组高于正常对照组(P<0.05),DSS+塞来昔布组低于DSS模型组(P<0.05),塞来昔布组与正常对照组无差异。 结论: 1. 6-8周雄性C57BL/6小鼠给予2.5%DSS溶液可诱导出结肠炎。 2.选择性COX-2抑制剂塞来昔布可抑制结肠组织中OSM的表达,下调STAT3及pSTAT3,加重DSS诱导的结肠炎。 3.OSM参与了DSS诱导的小鼠结肠炎的发病过程。