同种异体皮肤移植为早期、有效的覆盖大面积深度烧伤创面提供了一个良好的思路，但移植后排斥反应制约了该技术的应用。我们以移植领域的最新研究成果即联合移植来自同一供者的皮肤和不成熟树突状细胞能成功诱导耐受为基础，拟采用微染色体介导的基因转移技术，构建携带皮肤供者主要组织相容性抗原的第三方不成熟树突状细胞，以增强其诱导移植耐受的效果并解决临床工作中遇到的皮源与不成熟树突状细胞源不一致的矛盾。本实验为该课题的第一步，即建立体外大量扩增不成熟树突状细胞的方法。树突状细胞是体内最重要的专职抗原提呈细胞，具有很强的诱导初次免疫应答的能力，在感染免疫、移植排斥、肿瘤免疫等过程中发挥重要的作用。而不成熟树突状细胞由于缺乏协同刺激分子，在免疫应答过程中非但不能激活效应细胞，反而诱导其无能，从而导致免疫耐受。由于不成熟树突状细胞在体内分布广泛，且数量少，难以从组织中直接分离和纯化，目前多采用体外诱导树突状细胞前体细胞分化、发育的方法获得不成熟树突状细胞，但方法复杂、所需细胞因子剂量较大、培养时间较长，且各家报道的方法不一，主要表现在所用细胞因子种类、剂量、培养时间、培养基类型等方面，这些差异直接与其诱导耐受的效果相关。在本研究中，我们分别运用大剂量和小剂量rm GM-CSF对小鼠骨髓源的祖细胞进行培养，并从形态学、组合性细胞表面标志、混合淋巴细胞反应中刺激未致敏T淋巴细胞增殖三个方面进行鉴定，并根据严重烧伤病人体内存在大量如LPS等促使DC成熟的物质，在体外研究了它们对此类不成熟树突状细胞的影响。本研究分两部分进行：1、小鼠骨髓不成熟树突状细胞的体外扩增及鉴定；2、小鼠骨髓不成熟树突状细胞抗成熟特性的研究。主要结果和结论如下：1、小鼠骨髓源的祖细胞在单独应用小剂量rm GM-CSF培养6天后获得的细胞形态上具有树突状细胞的典型特征，在细胞表型、细胞功能实验上具有不成熟的特性，说明该实验建立的培养不成熟树突状细胞的方法是切实可行的。2、rm GM-CSF的剂量与细胞的成熟程度直接相关，一般说来，较大剂量的rm<WP=7>GM-CSF诱导生成的细胞以成熟树突状细胞为主，而小剂量rm GM-CSF诱导生成的细胞以不成熟树突状细胞为主。3、本实验中获得的不成熟树突状细胞在与LPS、TNF-α、IFN-γ共同培养3天后，其诱导未致敏T淋巴细胞增殖的能力并未增强，说明该细胞具有其它不成熟树突状细胞不具备的抗成熟特性。