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下丘脑-垂体-性腺内分泌轴调控着鱼类生殖活动。开展鱼类下丘脑或垂体的转录组分析,从中筛选鉴定新的功能基因有助于揭示鱼类生殖内分泌的分子机制。在本研究中,我们从银鲫垂体转录组数据库中筛选获得一个新基因,由于它含有LBH结构域,因此命名为limb bud and heart-like(lbh-like)。它与斑马鱼中一个假想蛋白XP001336471具有78%的相似性,且主要在垂体、端脑、卵巢和眼中表达。银鲫lbh-like具有母源的mRNA,尾芽期开始合成合子转录本。免疫荧光定位分析表明,银鲫lbh-like蛋白分布于神经垂体上。 同时,我们在斑马鱼中克隆了银鲫lbh-like的同源基因,它同样表达于垂体、脑、卵巢和眼。我们通过显微注射morpholinos(MOs)的方法对斑马鱼lbh-like进行了功能分析。lbh-like敲降后导致促甲状腺激素tfhβ和下丘脑发育重要基因nkx2.1a的表达水平显著减少,暗示新基因lbh-like可能在鱼类内分泌活动中起着重要作用,其信号通路仍需进一步研究。 接着,我们研究了lbh-like在斑马鱼视网膜发育过程中的功能。lbh-like在斑马鱼中最早于受精后30小时开始表达,它表达部位主要为脑和视网膜。注射lbh-like MO敲降Lbh-like会抑制多种光受体特异基因,如opsins、gnat1、gnat2和irbp的表达。otx2是光受体发育过程中起决定性作用的一个基因,但它在这个过程中的具体调控方式仍不清楚。在受精后26小时,敲降Lbh-like不影响otx2的表达;在受精后32小时,此时lbh-like基因刚刚开始表达,敲降Lbh-like导致otx2的表达水平显著下调。但在受精后72小时,在注射lbh-likeMO的胚胎中,otx2的表达量显著高于注射空白对照MO的胚胎。同时,在lbh-like敲降的胚胎中,共注射otx2或其下游靶基因neuroD能够挽救视网膜中的缺陷。结合启动子荧光素酶实验结果,我们认为斑马鱼lbh-like是光受体分化过程中的一个新的调节基因,且它对光受体的调节是通过作用于otx2来完成的。此外,敲降lbh-like增加Notch信号通路基因的表达,从而破坏了光受体前体细胞增殖、分化和生存之间的平衡。 Lrp2bp(low density lipoprotein receptor-related protein2 binding protein)是低密度脂蛋白受体家族的成员之一,最早发现于人胎脑的cDNA文库,在脂类信号通路中发挥着重要作用。生物信息学分析显示,斑马鱼Lrp2bp蛋白含有TPR结构域,与其他脊椎动物的LRP2BP蛋白序列保守性较高。半定量RT-PCR结果显示斑马鱼lrp2bp特异地表达于成体精巢组织中。原位杂交和免疫荧光结果显示lrp2bp定位于精巢组织的间质细胞中。采用TALEN敲除技术,敲除lrp2bp获得三种突变体lrp2bp-/-(+19bp)、lrp2 bp-/-(Δ10bp)和lrp2bp-/-(Δ14bp),初步分析显示lrp2bp不影响精巢内部结构及精子形态,但它可能参与调控雄激素11-KT的产生。