轮状病毒（Rotavirus，RV）是引起人类，哺乳动物和禽类病毒性腹泻的主要病原体，其中A组轮状病毒也是导致全球小于5岁的婴幼儿出现严重腹泻症状的主要原因。根据其病毒外壳蛋白具有的中和抗原活性，用P与G两种型别进行命名区分。对轮状病毒血清型的准确鉴定具有重要意义，可为疫苗针对性的开发与使用提供依据。实时荧光定量PCR（Q-PCR），可通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该方法实现了从定性到定量的飞跃，其特异性强，灵敏度高，自动化，重复性好，定量准确，成为分子生物学和分子诊断的重要技术平台，并广泛应用在遗传病学，病原体和肿瘤等方面的检测和诊断。因此，通过Q-PCR技术来快速诊断轮状病毒的阳性及其所属血清型是较为理想的方式。本实验以A组RV的G1，G3与G9亚型RNA作为样品,通过优化设计，摸索出最合理的分型多重Q-PCR反应体系，该体系可在1-2小时内完成检测反应，通过ABI7500型荧光定量PCR仪将FAM，CY5，JOE3个报告基团所发出的荧光在同一个坐标系中同时呈现出来形成结果报告。研究中先成功构建了G1+G9亚型的二重荧光定量PCR体系，该二重体系的检测灵敏度稳定在10~3copy/ul的模板量，并且准确率很高，不同亚型在体系中不会出现交叉影响，FAM与JOE两条荧光曲线能非常好的同时显示在同一个坐标中。后又在此二重体系的基础上，尝试构建出G1+G3+G9的三重检测体系，能较好的对G1，G3，G9亚型进行鉴别，FAM，CY5，JOE3个报告基团所发出的荧光不会相互干扰并且有较好的重复性。构建的检测方法可以为今后轮状病毒检测试剂盒的开发提供实验基础。