【摘 要】
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目的:通过实验,从氧化应激、炎症损伤和凋亡方面,探讨AH2QDS对百草枯中毒肾脏的保护机制,以及Apelin/APJ系统在解毒过程中的作用,为进一步研究AH2QDS的治疗作用提供理论基础。方法:（1）取72只SD雄性大鼠,每组随机分18只,分为4组:Control,PQ,PQ+Sivelestat,PQ+AH2QDS组。Sivelestat具有稳定的抗炎作用,作为阳性对照组。20%PQ 200mg
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目的:通过实验,从氧化应激、炎症损伤和凋亡方面,探讨AH2QDS对百草枯中毒肾脏的保护机制,以及Apelin/APJ系统在解毒过程中的作用,为进一步研究AH2QDS的治疗作用提供理论基础。方法:（1）取72只SD雄性大鼠,每组随机分18只,分为4组:Control,PQ,PQ+Sivelestat,PQ+AH2QDS组。Sivelestat具有稳定的抗炎作用,作为阳性对照组。20%PQ 200mg/kg（河南莱恩农药厂,LD50=200mg/kg）灌胃,建立动物中毒模型。中毒后2小时分别用Sivelestat腹腔注射、AH2QDS灌胃干预治疗。并分别于第1、3、7天取组织样本检测。（2）观察指标:大鼠一般情况,生存率及体重变化;消化道、肾组织PQ含量;肾组织切片HE染色;应用免疫荧光技术测定肾组织Apelin表达;通过Western blot实验检测肾组织IL-6、TNF-α炎症因子水平,以及Apelin/APJ、NF-κBp65、Caspase 1、Caspase 8、GRP78、CHOP 蛋白表达。（3）用人肾小管上皮细胞,了解AH2QDS有无直接治疗作用。首先通过CCK8实验检测PQ（标准品）的IC50,以及Sivelestat、AH2QDS对细胞活力影响。（4）根据PQ（标准品）IC50干预细胞24小时建立细胞中毒模型,去掉原培养基,再分别用Sivelestat,AH2QDS对细胞活力无影响的浓度治疗细胞24小时;通过CCK8检测各组细胞活力、比色法测细胞OH·-的含量,Elisa实验检测细胞IL-6,TNF-α的表达,观察AH2QDS对细胞治疗的直接作用。结果:（1）PQ组大鼠中毒0.5～1小时出现精神差,少动,眯眼,不吃,寒战,竖毛,毛色变黄,球样蜷缩,墨绿稀便,刺激反应差,行走蹒跚,站立不稳。第2到3天多数大鼠上述症状加重,部分较重者见口鼻血痂,消瘦明显,精神呆滞,气喘,吸气性喉鸣,全身四肢发绀,烦躁,抽搐,1到2天死亡。PQ+AH2QDS组和PQ+Sivelestat组表现相对较轻。PQ+AH2QDS组多数大鼠中毒后较少影响进食,中毒症状明显较轻,精神活动一般,体重增加明显。（2）消化道和肾组织PQ检测发现,PQ+AH2QDS组PQ含量明显低于PQ组（图1-3）有显著统计学意义。解剖发现,PQ组部分大鼠肾脏肿胀、外缘紫红或黑色、皮下淤血。HE染色显示PQ组肾组织广泛出血、淤血、肾小管上皮细胞空泡变性、管型;部分肾小球增大变形,肾小囊新月体样红染物沉积。PQ+Sivelestat 组、PQ+AH2QDS 组病理变化较轻（P＜0.05）。（3）中毒第3天,肾组织Apelin蛋白免疫荧光定量显示PQ+AH2QDS组高于PQ组,有显著统计学意义。PQ组肾组织IL-6、TNF-α因子水平高于PQ+AH2QDS 组,NF-κBp65、Caspase 1、Caspase 8、GRP78、CHOP 蛋白表达水平高于 PQ+AH2QDS 组（P＜0.05）;PQ+AH2QDS 组 Apelin/APJ 表达高于 PQ+Sivelestat和PQ组（P＜0.05）,并且在第3、7天表达量增加显著。（4）细胞实验中,CCK8检测PQ能使细胞生长活力降低,Sivelestat和AH2QDS能改善细胞活力,（P＜0.05）。同时,PQ+AH2QDS 和 PQ+Sivelestat 组 IL-6,TNF-α,OH·-和ROS的含量低于PQ组（P＜0.05）。结论:实验结果显示,AH2QDS直接或间接减轻PQ中毒导致的氧化应激、炎症反应、凋亡的病理过程,从而减轻肾组织损伤。AH2QDS的保护作用与Apelin/APJ表达上调存在相关性。
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