耐镉肠杆菌属(Enterobacter)菌株溶镉促生能力研究

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随着农用化学物质种类的丰富、工业化进程的发展,农业土壤镉污染已成为一严重的环境问题。物理化学等工程措施治理土壤重金属污染效果明显而稳定,但由于成本高、投资大,且容易引起土壤肥力减弱的情况,只适用于小面积重度污染的土壤区域。植物修复因其成本低、有利于改善土壤生态环境、可减少二次污染等优点受到广泛关注,但由于植物生长周期长、生物量小、生长制约因素较多而达不到理想的修复效果。通过根际微生物的促生、生防等机制促进植物生长,同时代谢产酸促进重金属溶解、提高重金属生物有效性,从而促进富集植物对重金属的吸收量,是有效增强植物修复的一个研究方向。本文在已筛选得到的具有较强耐镉能力的5株肠杆菌属细菌基础上,进一步研究了5株菌的溶镉能力,并以油菜、甜竹芥、印度芥菜三种蔬菜为试验对象,通过发芽率试验以及在不同介质、不同镉胁迫环境下的盆栽促生效果,进而筛选在重金属胁迫下促生作用明显的菌株,以期得到可实际应用于土壤修复的菌株,为植物-微生物修复的菌肥开发提供实践依据。根据基因序列比对分析,所筛选鉴定的5个菌株(菌12、13、14、19、25)与肠杆菌属细菌最为相似。5株菌具有良好的溶镉能力,添加碳酸镉摇瓶培养后溶镉率达到54%~68%。经利福平诱导产生抗性后的5株菌(菌b12、b13、b14、b19、b25),其溶镉率在45%~80%之间,与诱导前对应菌株的溶镉率间无明显差异,具有稳定的溶镉性能。5株菌对油菜、甜竹芥的发芽率均有不同程度的促进作用,其中菌12、13、19对油菜的发芽率具有显著提高作用,菌13、14、19、25均对甜竹芥的发芽具显著促进作用。5株菌对印度芥菜的发芽率无显著影响作用。无添加镉珍珠岩盆栽条件下,菌12、菌13、菌14对印度芥菜鲜重有显著提高作用,分别增产17.40%、20.74%、16.04%,5株菌对油菜、甜竹芥的生物量促生作用不明显。添加100 mg/L镉的珍珠岩盆栽条件下,菌14对油菜鲜重表现出促生趋势,增产15.92%,5株菌对甜竹芥、印度芥菜无明显作用。添加镉土壤盆栽条件下,菌14对印度芥菜有显著促生作用,产量最高,鲜重比对照增加3.58倍,菌14、菌19对油菜的鲜重具有提高的趋势,分别增产25.6%、12.28%。在不同镉浓度(0.3、20、100 mg/kg)土壤盆栽中,印度芥菜不添加镉处理的鲜重以及添加100 mg/kg处理的干重,显著高于对应的不接种处理。复合菌种构建试验中,接种3种腐熟真菌与灭菌培养基对照溶镉率无显著差异,均无明显溶镉能力,接种菌b14与菌b14和真菌分别混合的溶镉能力无显著差异。在低磷蔗糖培养基中,接种3种腐熟细菌与灭菌培养基对照溶镉率无显著差异,菌b14与巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌分别复合后,溶镉率显著高于菌b14单独的溶镉率。菌b14与腐熟真菌、细菌间无拮抗反应,可构建复合菌剂。接种含菌b14的复合菌剂模拟堆肥试验结果表明,前期接种的堆肥产品对含镉培养基的溶镉效率最高,达到24.6%。此外,在含镉的不同培养基中培养菌b14发现,LB培养基、低磷培养基对菌株产酸溶镉能力影响差异很大,其中LB培养基的成分中,蛋白胨与酵母提取物均对菌液产酸有明显抑制作用。
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