疏水层析是广泛应用于生物大分子分离纯化的技术,丁基琼脂糖(butyl-agarose)介质是常用的疏水分离介质.本文制备了丁基琼脂糖介质,考察了其性能,并对疏水吸附动力学与平衡过程的理论进行了初步探讨.首先以国产快流速琼脂糖凝胶为基质,用活化偶联法和直接偶联法制备了丁基琼脂糖介质.活化偶联法是指先活化琼脂糖凝胶,再将活化的琼脂糖凝胶与丁醇反应得到丁基琼脂糖介质.在琼脂糖凝胶的活化中,选用环氧氯丙烷作活化剂,考察了反应时间、环氧氯丙烷加入量、氢氧化钠浓度及加入量、反应温度等因素对产品环氧基密度的影响.然后用坏氧氯丙烷活化的琼脂糖凝胶与丁醇反应制备丁基琼脂糖介质,考察了氢氧化钠和三氟化硼乙醚两种催化剂对偶联反应的催化效果.直接偶联法是指将琼脂糖凝胶白球直接和丁基缩水甘油醚反应制备丁基琼脂糖介质.考察了直接偶联法中催化剂三氟化硼加入量、反应时间和缩水甘油醚加入量的影响.最终得到了两种产品:环氧活化的琼脂糖凝胶和丁基琼脂糖介质.制备实验结果表明:环氧氯丙烷对琼脂糖的活化效果较好,环氧基密度可达0.68 mmol/g-dry-gel;三氟化硼乙醚适合作活化偶联法的催化剂,而氢氧化钠不适合;直接偶联法是制备丁基琼脂糖介质的理想方法.考察了研制丁基琼脂糖介质的机械稳定性、吸附和分离性能进行.自制介质的压强-流速曲线基本为直线,介质在较高压强下形变很小,机械稳定性好,耐压性强,适用于大规模纯化生物大分子.自制疏水介质对牛血清白蛋白(BSA)和溶菌酶(lysozyme)饱合吸附量较高.硫酸铵浓度为1.6mol/L-2.0 mol/L时,疏水介质对BSA的吸附符合Langmuir等温吸附方程,表明在此条件下,BSA在疏水介质上的吸附为单分子层吸附.硫酸铵浓度为1.4mol/L,溶菌酶浓度低于0.035μmol/ml时,疏水介质对溶菌酶的吸附符合Freundlich等温吸附方程;硫酸铵浓度为1.6mol/L,疏水介质对溶菌酶的吸附既不符合Freundlich等温吸附方程也不符合Langmuir等温吸附方程.本文对疏水介质与蛋白质发生疏水相互作用的动力学和平衡过程作了基本假设,并以BSA为模型蛋白质进行了验证.本研究以国产的快流速琼脂糖凝胶为原料,合成了用于生物大分子分离纯化的丁基疏水介质,性能与进口同类介质接近,为疏水介质的国产化打下一定基础.