微小RNA-10b沉默对人三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响及机制研究

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背景miRNAs是一类小分子内源性单链非编码RNA,它通过与靶mRNA完全或不完全的互补结合,从而促进靶mRNA降解或抑制转录后基因的表达,而发挥相应的生物学作用。微小RNA-10b(miR-10b)作为miRNAs家族中的一员,参与多种肿瘤的生物学过程,其在乳腺癌中的生物学特性一直备受争议。人三阴性乳腺癌是指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及表皮生长因子受体2(Her-2)均表达缺失的乳腺癌,具有高侵袭性、组织学分级较高、预后较差和靶向治疗无效等特点。为明确miR-10b在人三阴性乳腺癌细胞中的生物学特性,本研究选取具有人三阴性乳腺癌特性的MDA-MB-231细胞为标本,探讨miR-10b沉默对其增殖、凋亡、侵袭和迁移及靶基因TIAM1表达的影响。目的探讨miR-10b沉默对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响,并探讨其对靶基因TIAM1表达的影响。方法1、用人工合成的miR-10b inhibitor瞬时转染MDA-MB-231细胞为实验组(IN组),同时设空白细胞组(Cell组)为空白对照,无义序列转染组(NC组)为阴性对照。转染48h后,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组细胞miR-10b的表达,以检测沉默效果。2、CCK-8法、流式细胞术、Transwell侵袭和迁移实验分析转染后各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力变化。3、Real-time PCR和Western blot法检测转染后各组细胞TIAM1mRNA和蛋白的表达。结果1、Real-time PCR结果显示:转染miR-10b inhibitor后,与对照组相比,miR-10b的相对表达量明显下调,表明成功沉默miR-10b的表达。2、CCK-8法检测结果表明:miR-10b沉默后,48h和72h增殖率均明显上调(P<0.01),增殖效应在48h之后出现,并一直维持到72h。3、流式细胞术检测结果表明:miR-10b沉默后,早期和晚期细胞凋亡比例分别1.77%和1.61%,均明显下调(P<0.05),差异有统计学意义。4、Transwell侵袭和迁移实验结果表明:转染48h后,穿过基质膜的侵袭和迁移细胞数分别为(212.17±13.57)个和(322.67±8.62)个,均明显上调(P<0.01)。5、Real-time PCR和Western blot法结果显示:TIAM1基因在mRNA水平变化不大(P>0.05),在蛋白水平表达上调(P<0.05)。结论miR-10b沉默可以促进MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭和迁移并抑制凋亡,其机制可能与miR-10b沉默后在转录后水平上调TIAM1蛋白的表达有关。
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