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目的:建立幼鼠DEHP青春前期暴露的整体动物模型,观察幼鼠焦虑和抑郁样行为的变化,从病理变化、氧化应激反应、GABA信号通路和ERK1/2-CREB信号通路着手,初步探讨DEHP青春前期暴露的神经毒作用机制。方法:建立整体动物模型:3周龄雄性SD幼鼠(SPF级)分为两个实验组:实验一组80只幼鼠按体重随机分为溶剂对照组、1、10、50、200mg/kg/d DEHP剂量组;实验二组50只幼鼠按体重随机分为溶剂对照组、低剂量对照组(1mg/kg/d DEHP)、低剂量干预组(1mg/kg/d DEHP+1mg/kg/d Muscimol)、高剂量对照组(200mg/kg/d DEHP)和高剂量干预组(200mg/kg/d DEHP+1mg/kg/d Muscimol)。连续染毒21天。选用旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验观察幼鼠焦虑和抑郁样行为表现。处死幼鼠后,检测血清生化指标、Nissl染色观察海马病理变化,检测大脑皮层MDA水平和SOD活力,免疫组化法、Western blot法检测幼鼠海马GABA_ARα2、GAD65+67、ERK1/2、CREB、p-ERK1/2和p-CREB表达水平。结果:1.行为学改变:(1)一般行为:各组幼鼠一般情况良好,进食、饮水未见异常。(2)强迫游泳实验:与对照组相比,1mg/kg/d剂量组幼鼠游泳不动时间明显升高,200mg/kg/d剂量组雄鼠休息次数显著降低(P<0.05);(3)旷场实验:与溶剂对照组相比,高剂量对照组中心路程和探索时间显著减少,低剂量干预组和高剂量干预组总路程明显升高,各剂量组修饰次数明显减少(P<0.05);与高剂量对照组相比,高剂量干预组总路程、中心路程和探索时间明显升高(P<0.05)。(4)高架十字迷宫实验:与溶剂对照组相比,低剂量对照组和高剂量对照组幼鼠进入开臂的次数和开臂路程显著降低,高剂量对照组在开臂中停留的时间比和总路程明显降低,高剂量干预组进入闭臂的次数明显降低(P<0.05);与低剂量对照组相比,低剂量干预组开臂路程明显升高(P<0.05);与高剂量对照组相比,高剂量干预组进入开臂的次数、开臂路程和总路程明显升高(P<0.05)。2.一般毒性:(1)实验一组:染毒21天10mg/kg/d剂量组幼鼠体重增加值明显低于对照组(P<0.05);10和200mg/kg/d剂量组幼鼠心脏脏器系数、3个高剂量组幼鼠肺脏脏器系数显著升高(P<0.05);10mg/kg/d剂量组幼鼠血清Glu水平明显降低(P<0.05),50mg/kg/d剂量组幼鼠血清UREA水平明显升高(P<0.05)。(2)实验二组:高剂量对照组幼鼠肺脏脏器系数较溶剂对照组明显升高(P<0.05);高剂量对照组和高剂量干预组血清Glu水平较溶剂对照组明显降低(P<0.05)。3.病理变化:(1)实验一组:各DEHP剂量组Nissl体数量较对照组显著减少,明显淡染,细胞排列疏松。(2)实验二组:各剂量组DG区Nissl体数量较对照组减少,明显淡染。4.氧化应激:(1)实验一组:200mg/kg/d剂量组雄性幼鼠大脑皮层SOD活力较对照组明显降低(P<0.05);(2)实验二组:高剂量对照组雄性幼鼠大脑皮层SOD活力较溶剂对照组明显降低(P<0.05)。5.机制探索:(1)实验一组:Western blot结果显示,与对照组相比,10、50和200mg/kg/d剂量组ERK1/2、200mg/kg/d剂量组GABA_ARα2、50和200mg/kg/d剂量组GAD65+67表达水平、200mg/kg/d剂量组CREB表达水平降低,1mg/kg/d剂量组CREB磷酸化水平显著升高(P<0.05)。(2)实验二组:Western blot结果显示,各剂量组海马GABA_ARα2、高剂量对照组GAD65+67表达水平显著下降(P<0.05);Muscimol可逆转DEHP暴露所导致的GAD65+67表达水平的降低。免疫组化结果显示,低剂量对照组、高剂量对照组和高剂量干预组CA2区、高剂量对照组CA3区GABA_ARα2表达水平明显下降(P<0.05);高剂量干预组CA3区GABA_ARα2表达水平较高剂量对照组明显升高(P<0.05);高剂量干预组CA3区ERK1/2表达水平较溶剂对照组显著减少(P<0.05);高剂量干预组CA3区ERK1/2表达水平显著低于高剂量对照组(P<0.05);高剂量干预组CA1区CREB表达水平明显降低(P<0.05),低剂量干预组CA1、CA2和CA3区CREB表达水平均显著降低(P<0.05);低剂量干预组CA1和CA2区CREB表达水平明显低于低剂量对照组(P<0.05);高剂量干预组CA1、CA2和CA3区CREB表达水平明显低于高剂量对照组(P<0.05)。结论:本实验条件下,DEHP暴露会引起雄性幼鼠出现焦虑和抑郁样行为,其作用机制可能与氧化应激反应、GABA信号通路和ERK1/2-CREB信号通路有关,具体机制尚有待于进一步深入研究。