不同分子量壳聚糖膜的制备、降解、缓释及壳聚糖抗菌性能的研究

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【目的】种植义齿是目前口腔修复学研究的热点,许多研究集中在如何通过种植体表面改性提高种植体与骨的结合。利用各种生长因子等蛋白质药物可以促种植体与骨的结合,但生长因子易破坏,难于固定在种植体表面,所以需要寻找合适的载体来携带。本实验拟通过不同分子量壳聚糖的制备来研究不同分子量壳聚糖膜的成膜、缓释、降解;探索不同分子量的壳聚糖抗菌性能,进而为壳聚糖膜作为生长因子载体提供实验依据。【材料和方法】1.以10万分子量的壳聚糖为原料,利用过氧化氢法对原料进行降解,从而得到低分子量水溶性壳聚糖;用粘度测定法测定出所制备的壳聚糖的分子量;采用4种不同分子量的壳聚糖,分别制备含有和不含明胶的壳聚糖膜;初步探索了低分子量壳聚糖(壳寡糖)的成膜方法。2.用7种壳聚糖膜为一组,共4组各加入磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution,PBS)30ml,37℃保存,于第1、2、3、4周任意取出一组,于60℃干燥24小时后测定其不同时时间的降解率;用10万分子量壳聚糖膜含明胶及不含明胶各一种,加入PBS溶液5、10、15、20、25、30ml,37℃保存,于1周取出,60℃干燥24小时,测定溶液量对壳聚糖膜降解的影响;用7种壳聚糖膜分别加入含酶(共4种)的蒸馏水20ml,37℃反应4小时,60℃干燥24小时,测定不同酶对壳聚糖膜降解的影响;3.采用纸片扩散法研究壳聚糖的抗菌性能,分别用45万、20万、10万、3.2万、2.19万、1.26万、0.63万、0.55万、0.3万分子量的壳聚糖配制成2%的壳聚糖溶液,以金黄色葡萄球菌的标准菌株为对象研究不同分子量的壳聚糖抗菌性能的差异;以10万分子量的壳聚糖为代表加入明胶使溶液中明胶浓度为1mg/ml、2mg/m1、3mg/m1、4mg/ml,探讨明胶对壳聚糖抗菌性能的影响。【结果】1.制备低分子量壳聚糖:利用过氧化氢法能降解壳聚糖,可制备分子量最低至3000左右的低分子量壳聚糖(壳寡糖),而利用粘度测定能比较准确的得到壳聚糖的分子量,该方法切实可行;对于大分子量的壳聚糖,含2mg/ml壳聚糖的乙酸溶液40ml,用溶剂蒸发法能很好的制备成膜,在制备过程中,加入明胶与否并非成膜的必须条件。而对于分子量3000的壳聚糖加入明胶是成膜的必备条件,与此同时必须加入甘油来改善该膜的理化性质;2.不同分子量壳聚糖膜降解:在相同pH值条件下不含明胶的壳聚糖比同样分子量含明胶的壳聚糖降解要快;对不同分子量的壳聚糖膜而言,分子量越大降解越慢。所有不含明胶的壳聚糖膜2周内均完全降解;加入酶能促进壳聚糖的降解,酶对壳聚糖膜的降解效果与酶的种类有关,纤维素酶的效果最好,溶菌酶的效果最差,脂肪酶和木瓜蛋白酶效果相近在,上述两者之间。释放率:含明胶的壳聚糖膜突释比不含明胶组明显,所有壳聚糖膜在一定时间内均匀释放蛋白质药物。3.不同分子量壳聚糖的抑菌:壳聚糖具有一定抑菌能力,该能力与壳聚糖的分子量有关,对会黄色葡萄球菌而言,壳聚糖抑菌力随分子量的减小不断增强,在分子量达到6300时抑菌作用最强,此后抑菌作用又逐步减弱。加入明胶能明显抑制壳聚糖的抑菌作用,但加入1mg/ml-4mg/ml的明胶对壳聚糖抑菌作用的影响无明显相关性。【结论】利用化学降解方法可制备出不同分子量的壳聚糖,不同分子量的壳聚糖成膜性不同。45万、20万、10万的壳聚糖均能不依赖明胶成膜,而3000分子量壳聚糖成膜则需加入明胶和甘油。不含明胶的壳聚糖降解较快,14天左右完全降解,不适于用来作为种植体表面蛋白质药物载体。而含明胶壳聚糖降解较慢,具有良好的缓释性能,3000分子量的含明胶壳聚糖膜从降解、缓释、抑菌作用来看都是较适合用作种植体表面蛋白质药物载体。
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