人胸腺肽α1（Tα1）和人干扰素ω1（IFNω1）都具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节的活性。其中Tα1已经有效地用于治疗慢性病毒性肝炎、部分恶性肿瘤及免疫功能重建，但是目前动物胸腺来源的和人工合成的Tα1产量远远不能满足临床需求。值得注意的是，国内外多篇文献报道Tα1联合IFNα应用对慢性病毒性肝炎和多种恶性肿瘤较单独应用Tα1或IFNα的疗效更好。然而，Tα1在人体内的半衰期仅为1.5 hr，如何延长其体内疗效仍然是一个挑战。另外，在长期或反复应用IFNα的病人中时常发现针对IFNα的抗体应答，这损害了IFNα的疗效。与IFNα相比，IFNω1的优点是其抗原性完全不同于包括IFNα在内的任何其他类型的干扰素，而且抗病毒（HBV、HIV）活性并不亚于IFNα，所以有替代IFNα，使用的潜力。 在本研究论文的第一部分，鉴于原核表达系统已经成功地用于多种药用蛋白的高效表达与生产，我们拟构建和筛选可高效表达、方便纯化的Tα1大肠杆菌表达系统。方法：人工合成的Tα1基因以双酶切定向克隆法插入至原核表达载体pET-28a、pET-9c、pThioHis B、pGEX-2T和pBV222，经过核酸测序确认获得阳性克隆，然后在相应的大肠杆菌宿主中进行诱导表达。温度诱导型DH5α／pBV222和异丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导型BL21／pET-28a来源的细菌裂解液上清经过80℃／30min热处理，离心后上清经过固定化镍亲和层析，最后用250mmol／L咪唑洗脱获得胸腺肽融合蛋白。融合蛋白被肠激酶切割（28℃／12 hr）后，将蛋白酶切混合物加样于固定化镍亲和层析柱，收集穿过液，最后经反相高效液相色谱（HPLC）进一步分离纯化，收集停留时间约为13 min的主峰样品，即得到重组Tα1。结果：十二烷基硫酸钠-聚苯烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示，BL21／pET-28a表达系统的融合蛋白表达水平最高，占细菌总蛋白的70％，其原因可能是使用了强活性的转录调控序列和大肠杆菌偏爱的密码子。反相HPLC分析表明，经过镍柱亲和纯化后，来自DH5α／pBV222表达系统的Tα1纯度达到72％，而BL21／pET-28a表达系统来源的Tα1纯度仅为32％，这可能与肠激酶不纯导致重组胸腺肽降解、酶切条件不当等因素有关。不论在DH5a/pBV222还是在BL21/pET-28a，经HPLC分离获得的最终重组胸腺肽纯度均达到99％以上，二者最终获得的Tal分别为细菌湿重的0.14％和0.11％，远远高于动物胸腺组织提取法的产率。在玫瑰花环试验中，该重组胸腺肽（终浓度75 μg/m1）显示出相当于化学合成胸腺肽的活性，使人外周血T淋巴细胞玫瑰花环形成率明显升高。结论：BL21/pET-28a和DH5cdpBV222两个系统都有望用于重组胸腺肽的高通量制备。 在本研究论文的第二部分，我们设想Tαl与IFN—ωl的双基因真核表达质粒可以发挥类似Tαl联合IFNα应用的体内效果，并且能克服Tαl在体内的短半衰期和反复应用IFNα所致的不良抗体应答。 目标：评价脂质体介导人胸腺肽αl与人干扰素ω1基因治疗肿瘤的潜在效果。 方法：人胸腺肽αl与人干扰素ωl的CDNA分别通过人工合成或RT-PCR获得。构建携带这两个基因及其中之一的真核表达载体（plRES2），并经过Source－100层析柱大量纯化后，与脂质体混合，经尾静脉途径注射至荷Hep-A-22肝瘤的ICR小鼠。每组小鼠10只，每只每次注射40μg质粒DNA，连续7天给药。以接受空载质粒的动物组为对照，对这三个处理组的肿瘤抑制能力进行评价（t检验）。采用DNA片段化分析肿瘤细胞的凋亡。 结果：只有双基因处理组达到合格的抑瘤率（43％），而单基因处理组的抑瘤率不足30％。与对照组相比，单基因组和双基因组的瘤重差异在统计学上分别达到显著水平（P<0.05）和极显著水平（P<0.01）。DNA梯带现象在三个基因处理组的肿瘤细胞都能观察到，但在对照组肿瘤细胞未观察到。 结论：脂质体介导的双基因质粒明显较Tαl或IFN-col基因质粒对小鼠Hep。A-22肝肿瘤生长的抑制能力强。这表明人IFNml基因与Tαl基因的共表达质粒可明显提高基因治疗的效果，这种效果的提高可能是由于人Tαl与人IFNml表达增高，间接或/及累加地诱导肝肿瘤细胞凋亡的结果。同时提示人IFNml在小鼠有一定的抗肿瘤交叉种属性。