【摘 要】
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本研究从广西武鸣县采取的土样中筛选到一株产脂肪酶的野生菌株,通过16S rDNA序列的同源性比对和建立系统发育树分析,初步鉴定该菌株属于葡萄球菌属(Staphylococcus),并命名
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本研究从广西武鸣县采取的土样中筛选到一株产脂肪酶的野生菌株,通过16S rDNA序列的同源性比对和建立系统发育树分析,初步鉴定该菌株属于葡萄球菌属(Staphylococcus),并命名为STL-01。利用PCR技术分别从STL-01和本实验室保藏并已完成全基因组测序的链霉菌GXT-6(CICC 11021)中各克隆到一个脂肪酶基因,分别命名为lip1和lip3。分别将lip1和lip3两个基因与表达载体连接构建重组质粒,然后导入大肠杆菌中进行表达,经镍柱亲和层析纯化获得重组脂肪酶后进行酶学性质分析。结果表明：重组脂肪酶Lip1在25℃具有最高活力,在0℃和10℃时有32.5%和70.2%的相对活力；最适pH为8.0,在pH6.0-9.0范围内有较高的酶活力；最适底物为C8 (pNPH/对硝基苯酚辛酸酯),且作用的底物范围较广,对C2-C16都有一定的水解能力；5 mM的Ba2+、Zn2+、 Ni2+、Ca2+、Fe3+对其有很明显的抑制作用,1%(w/v)的离子型表明活性剂SDS和CTAB几乎完全抑制其水解活力,能耐受10%(v/v)的乙醇、1,2-丙二醇、丙酮、正己烷、DMF及15%(v/v)的甲醇。重组脂肪酶Lip3在40℃具有最大活性；最适pH为7.0,在pH5.5-10.0范围内有很好的稳定性；最适底物为C2 (pNPA/对硝基苯酚乙酸酯),同时对C6 (pNP H/对硝基苯酚己酸酯)有非常强的水解作用,5 mM的Zn2+几乎完全抑制其水解活力,能够耐受10%(v/V)的乙醇、1,2-丙二醇、正己烷、DMSO及55%(v/v)的甲醇。
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