疫苗接种是预防流感最有效的方法,目前投入使用的流感疫苗可分为灭活苗和减毒活苗两大类:灭活苗通过肌肉注射途径免疫,能够诱发机体产生针对血凝素的中和抗体,但无法刺激鼻腔黏膜产生分泌型抗体,也无法诱导产生细胞免疫应答;减毒活苗(冷适应减毒活苗)通过鼻吸入的方式免疫,其免疫的方式更接近自然感染的过程,可充分诱导体液免疫及细胞免疫应答。减毒活苗无论从免疫途径还是免疫效果上都优于传统灭活苗。自反向遗传操作技术建立以来,研究者们尝试过多种方法开发减毒活苗,降低流感病毒毒力,提高其免疫原性,研究出安全有效的减毒活苗已成为新型流感疫苗的发展方向。在本研究中,我们根据A型流感病毒密码子使用偏嗜性的统计规律,在保留NS片段包装信号和不影响NS1/NS2剪切位点的前提下,选取稀有密码子对A/Puerto Rico/8/34(H1N1)病毒NS1基因内部110个氨基酸区域进行密码子同义突变改造,将其替换为病毒使用频率最低的密码子,全基因合成NS基因,利用12质粒反向遗传操作技术拯救出含有密码子去优化NS1基因的重组病毒(deoptimized NS, deoNS)。MDCK细胞噬斑形成实验表明,病毒在细胞上的成斑能力大大减弱;病毒在MDCK细胞上的生长曲线表明,其在细胞内的复制能力比野生型病毒低约1000倍。BALB/c小鼠体内致病力实验证明,deoNS病毒不能引起小鼠发病和死亡,感染第3天病毒在小鼠肺内的复制滴度比野生型病毒低100倍,感染第5天其在小鼠肺内的滴度比野生型病毒低1000倍。本研究初步探索了通过基因组密码子去优化改造途径降低A型流感病毒毒力的可行性,首次证明流感病毒NS1基因密码子去优化同义突变可以降低病毒毒力,为流感减毒活疫苗的研究提供了新的思路。