论文部分内容阅读
研究背景及目的长非编码RNA(Lnc RNAs)已成为多种癌症新的基因调控因子和预后标志物。lnc RNA核丰富转录本1(NEAT1)与肿瘤的发生有关,已有研究报道NEAT1在肾透明细胞癌(Clear cell renal cell carcinoma,cc RCC)表达上调。在肾癌患者中,NEAT1的高表达与肿瘤进展和生存不良有关。NEAT1基因敲除抑制肾癌细胞增殖,通过抑制上皮向间充质转化表型抑制肾癌细胞迁移和侵袭。目前在生物体内已发现100多种RNA修饰。一些研究已经广泛地报道了某些类型的RNA修饰有核m RNA,包括N1-甲基腺苷(m1A)、N6-甲基腺苷(m6A)和5-甲基胞嘧啶(m5C),其中m6A是在20世纪70年代首次发现的。目前,m6A的表位转录修饰引起了人们的关注。m6A RNA修饰是大多数真核生物中最丰富的m RNA和非编码RNA的内部修饰,m6A RNA修饰的生理重要性已被其在组织发育和分化中的关键作用所证实。m6A RNA修饰在不同的水平上调节m RNA,如结构、成熟、稳定、剪接、输出、翻译和衰退。此外,m6A RNA修饰还参与细胞命运的决定、细胞周期调控、细胞分化和昼夜节律的维持,大量的RNA结合蛋白(RBPs)也受到m6A RNA修饰的影响。m6A RNA修饰是一个动态且可逆的转录后修饰过程,这一过程由一组蛋白介导的,包括甲基转移酶“写入器”(WTAP、METTL3和METTL14)、去甲基化酶“擦除器”(FTO和ALKBH5)和甲基识别蛋白“读取器”(YTHDF1、YTHDF2、YTHDF3、YTHDC1和YTHDC2)。虽然RNA的m6A修饰被发现与不同类型癌症的发生有关,但人们对m6A相关基因与RCC之间的关系知之甚少。因此我们从RNA m6A修饰相关基因与NEAT1分子的相互关系出发,探索m6A修饰相关基因对NEAT1的作用及机制,可能为肾癌的治疗提供新的线索。研究方法1、检测METTL14在肾癌组织中的表达量和METTL14对肾癌细胞系增殖和迁移的能力影响,并验证METTL14可影响NEAT1对肾癌的功能影响。2、根据NEAT1序列信息推测NEAT1是否存在m6A修饰位点,并探索RNA m6A写入者METTL14和NEAT1的相互影响关系。3、探索和NEAT1结合的m6A读取者YTHDF2,验证NEAT1和YTHDF2的结合。4、探索NEAT1表达量和YTHDF2的相互作用关系。5、检测YTHDF2在肾癌中的表达特点及功能影响,验证肾癌细胞中YTHDF2对NEAT1的功能影响。6、通过临床样本验证NEAT1和YTHDF2的关系及其对临床预后的影响。结果1、METTL14在肾癌组织中低表达,并抑制肾癌细胞的增殖和迁移能力。并可影响NEAT1在肾癌细胞中的促癌作用。2、通过m6A修饰位点预测软件SRAMP预测NEAT1上存在m6A修饰位点,并受到METTL14的负向调控,并与METTL14存在结合关系。3、YTHDF2可结合NEAT1,并降低NEAT1的表达4、YTHDF2在肾癌中低表达,抑制肾癌细胞的增殖和迁移功能,并通过抑制NEAT1的表达影响肾癌细胞的功能。5、NEAT1的表达与患者预后呈负相关,YTHDF2与NEAT1表达呈负相关。结论METTL14及YTHDF2通过m6A影响NEAT1的表达和功能,METTL14及YTHDF2在肾癌中起到抑制肿瘤增殖及迁移的作用,NEAT1的m6A修饰有望成为肾癌基因靶向治疗的新靶点。