弓形虫是一种机会性致病病原体，广泛分布于世界各地。弓形虫的感染途径多样化，可水平及垂直传播，经呼吸道、消化道、眼结膜、损伤的皮肤等均可造成感染，弓形虫的宿主范围极广，大多数温血动物均可被感染，当畜禽被感染后，大多数无明显的临床症状，呈隐性感染状态、但当机体，免疫力低下或免疫抑制时可表现出明显的临床症状，甚至死亡。妊娠母畜感染弓形虫后，可引起流产，死胎，畸形胎等，存活者也常有畸形、发育不良、生长缓慢等症状。该病对人的影响也非常严重，可引起人的脑炎，结膜炎，特别是对艾滋病患者及孕妇的危害极大。弓形虫SAG1和MIC3蛋白在不同毒力虫株的速殖子时期都可表达，在弓形虫速殖子吸附和侵入过程中起重要作用，因此本研究制备了SAG1和MIC3的相应识别抗体，建立了间接荧光虫体检测方法，适用于不同毒力虫株速殖子的检测并且能够为深入开展弓形虫侵入机制研究和流行病学研究提供有力支持。　　 本研究原核表达并纯化SAG1重组蛋白，免疫BALB/c小鼠，取脾与SP2/0细胞融合，经三到四次亚克隆，获得了8株稳定分泌、能与重组SAG1蛋白结合的单克隆抗体分泌株：2D8、2G2、3G12、4B7、4H8、5A2、6E1、7C1。以提取的虫体可融性蛋白和SDS溶解的虫体蛋白ELISA鉴定这8株抗体，得到一株4B7可识别虫体蛋白。经测定该株抗体亚型为IgG1，滴度为1∶3200，经western blot鉴定4B7与重组SAG1有良好反应性。至此，本研究制备并鉴定得到了一株稳定的抗弓形虫SAG1单克隆抗体分泌细胞株。　　 原核表达的MIC3重组蛋白复性后，作为抗原，免疫BALB/c小鼠，取脾与SP2/0细胞融合，经四次亚克隆，获得了3株稳定分泌，以重组MIC3蛋白和提取的虫体蛋白ELISA均能反应的单抗分泌株：1E1、1G12、4G1。经测定，三株MIC3单抗的亚型4G1(效价1∶3200)为IgG1，1G12(效价1∶12800)和5D7(效价1∶1600)均为IgG2b。此研究表明，本文使用重组MIC3蛋白制备的单克隆抗体具有良好的特异性。　　 利用抗弓形虫SAG1和MIC3蛋白的单克隆抗体，建立弓形虫间接免疫荧光观察方法，并进一步尝试建立弓形虫虫体间接免疫荧光检测方法。间接免疫荧光方法鉴定抗SAG1和抗MIC3单抗株反应性，抗MIC3的4G1和1G12株可见特异性MIC3蛋白虫体定位荧光，而抗SAG1的4B7未见荧光。为验证涂片虫体荧光检测方法的可行性，对猪的全血血样进行涂片虫体荧光检测，以特异性虫体荧光和镜检到特征性虫体作为判定阳性标准。对血样析出的血清进行抗弓形虫IgG抗体的ELISA检测。17个猪血样品中，经商品化试剂盒鉴定有11个血样为IgG抗体阳性，而其中只有8个可观察到特异性荧光和相应虫体特征。检测吻合率为82％。结果证明，涂片虫体荧光检测方法特异性良好，可信度高，并且可反映样品的带虫感染状态。　　 综上所述，本研究成功制备了抗弓形虫SAG1和抗MIC3的单克隆抗体并成功应用于建立间接免疫荧光虫体观察检测方法。