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纤维结合蛋白(Fibronectin，Fn)是一种具有重要生物学活性的大分子二聚体冷凝糖糖蛋白，分子量约450KD，含2300个左右氨基酸和约5％的糖，广泛存在于血浆和其他生物学流体中，如精液乳浆、尿、奶、羊膜流体和唾液等。血浆Fn由两个相似但不相等的多肽糖蛋白亚基(分子量分别为220KD和230KD)组成，两亚基间通过二硫键连接，二硫键位于分子的C末端。每条Fn单链含有30个链内二硫键，分布在多肽链的两端，N端22个，C端8个。纤维结合蛋白在许多生理活动中起着重要的作用，如胚胎形成、血液凝结、伤口愈合和肿瘤形成等。本文根据纤维结合蛋白与明胶具有特异性结合的特点，采用硝酸纤维膜法和明胶亲和层析法两种方法来纯化猪血浆中纤维结合蛋白，并对其纯化工艺进行优化，最后得到高纯度(电泳纯)，高收率(亲和层析法收率为88.3％，硝酸纤维膜法收率为54.9％)的具有生物学活性的纤维结合蛋白。
明胶亲和层析中，分别对血浆上样量、血浆在亲和柱内保存时间以及洗脱缓冲液中的盐浓度进行了优化实验，结果表明：血浆上样量为20mL，洗脱液中含盐量为1.0M NaCl，血浆在柱内的保存时间为15min时实验效果较好，此时的Fn回收率可达88.3％，经SDS-PAGE电泳分析为单一条带，与牛血浆Fn在同一位置。实验中，进样流速控制在1mL/min，洗脱速度为1.5mIdmin，第三个峰为洗脱的纤维结合蛋白峰，目标蛋白的收集规格为1.5mL/管。 由于明胶与纤维结合蛋白具有特异结合的特点，首先对硝酸纤维膜进行膜进行偶联，偶联条件为2mL/10cm<2>的1％明胶，37℃水浴1h。还对其亲和吸附条件如：血浆稀释比例、水浴温度、水浴时间、洗脱时间、洗脱液浓度和洗脱体积进行优化，结果表明：血浆按1∶2稀释，水浴时间2h，水浴温度37℃，洗脱目的蛋白时间为10～25min，洗脱液浓度4～8mol/L，洗脱体积为每50cm<2>的膜用2～6mL来洗脱时，可以获得较大的单步收率(54.9％)，纯度较高(经SDS-PAGE电泳检测为单一条带)的具有生物活性的纤维结合蛋白。经免疫双扩散实验，发现与兔抗猪纤维结合蛋白抗血清能产生免疫沉淀反应。对纯化后的纤维结合蛋白的理化性质进行检测表明，本实验室自制的纤维结合蛋白在下列最佳操作条件下，仍然保持了较大的反应活性：4℃条件下保存一个星期；-20℃保存5个月，在此低温下可反复冻融5次；室温下可保存3天，此后再经SDS-PAGE电泳检测，发现没有条带。还对纯化后的纤维结合蛋白进行氨基酸组成和含量检测，检测条件为：流速控制在1mL/min，用c18的HPLC色谱柱保持38℃恒温，检测波长为254nm，结果表明与人的Fn组成和含量非常相近，这为其应用于临床提供了理论依据。纯化的Fn等电聚焦实验结果为：4％的聚丙稀酰胺凝胶可以获得较好的分离效果，电泳条带与3～10的Marker相比，等电点在5.85附近。毛细管电泳的实验条件为：0.5psi压力下进样5s，电压18Kv，电泳时间15min，检测波长为280nm，经软件分析计算纯度为95％。