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目的:心脏毒性是抗肿瘤药物常见的不良反应之一,尤其是蒽环类抗肿瘤药物最为明显。磷酸肌酸钠(Creatine Phosphate Sodium, CP)作为一种高能磷酸化合物,不仅可以在心肌细胞遭受缺血缺氧时为其提供能量,还可以保护心肌细胞膜免受氧自由基等有害物质的侵袭。作为心肌保护剂已被广泛应用于心脏内外科临床。有学者认为肿瘤细胞是高耗能细胞,应用磷酸肌酸可能会促进肿瘤的生长。本研究通过体外试验探讨磷酸肌酸钠对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响,并对可能存在的机制进行初步的探讨,从而为肿瘤患者是否能够应用磷酸肌酸来保护心脏提供参考依据。方法:1选取人卵巢癌SKOV3细胞系进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay, MTT)法检测磷酸肌酸钠不同浓度组(1、6、12mmol/L)、不同时间组(24、48、72h)对细胞存活和生长的影响情况。2流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测磷酸肌酸钠对人卵巢癌SKOV3细胞周期分布和凋亡的影响。3根据MTT的结果,设置对照组及实验组,分别提取各组细胞总RNA,鉴定其完整性及含量,通过逆转录-聚合酶链反应(revers transcription PCR,RT-PCR)半定量检测磷酸肌酸钠处理前后SKOV3细胞中CyclinD1mRNA、Bcl-2mRNA的表达水平。4采用流式细胞术检测磷酸肌酸钠处理前后SKOV3细胞中CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达变化。结果:1 MTT结果显示:磷酸肌酸钠(1、6、12mmol/L)对SKOV3细胞具有抑制增殖的作用。磷酸肌酸钠1 mmol/L组处理SKOV3细胞24、48、72h后,与对照组相比,OD值有所下降,但差异无显著性(P>0.05)。磷酸肌酸钠6、12mmol/L组处理SKOV3细胞24、48、72h后,与对照组相比,OD值均有不同程度的下降,差异具有显著性(P<0.05)。随着磷酸肌酸钠处理浓度的增大、作用时间的延长,抑制率逐渐升高,即磷酸肌酸钠对SKOV3细胞的增殖抑制作用呈剂量—效应和时间—效应依赖关系。以磷酸肌酸钠12mmol/L组处理SKOV3细胞72h的增殖抑制作用最明显。2流式细胞仪检测SKOV3细胞凋亡和周期分布显示, 1、6、12mmol/L磷酸肌酸钠作用SKOV3细胞72h后,随药物浓度增大,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少。即磷酸肌酸钠可阻滞SKOV3细胞周期进程于G0/G1期,该作用呈剂量—效应依赖关系。1、6、12mmol/L磷酸肌酸钠作用SKOV3细胞72h后,未出现典型的亚二倍体凋亡峰,凋亡百分率与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。3 RT-PCR检测结果显示:磷酸肌酸钠不同浓度组处理SKOV3细胞72h后,CyclinD1mRNA有不同程度的降低。磷酸肌酸钠1 mmol/L组处理SKOV3细胞72h后,CyclinD1mRNA表达有所降低,但与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。磷酸肌酸钠6、12 mmol/L组处理SKOV3细胞72h后,CyclinD1mRNA表达降低,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。以磷酸肌酸钠12mmol/L组作用72h对SKOV3细胞CyclinD1mRNA表达抑制最显著。磷酸肌酸钠1、6、12 mmol/L组处理SKOV3细胞72h后,Bcl-2mRNA表达水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。4流式细胞术检测CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平结果显示:0、1、6、12mmol/L磷酸肌酸钠处理SKOV3细胞72h后,SKOV3细胞中CyclinD1蛋白表达荧光指数(FI值)分别为1、0.988、0.863、0.718,Bcl-2蛋白表达荧光指数(FI值)分别为1、0.977、0.947、0.912。对于CyclinD1蛋白,磷酸肌酸钠1mmol/L组与对照组的FI值相比,差异不具有显著性(P>0.05);磷酸肌酸钠6、12mmol/L组与对照组的FI值相比,差异具有显著性(P<0.05)。以磷酸肌酸钠12mmol/L组作用72h对SKOV3细胞CyclinD1蛋白表达抑制最显著,与RT-PCR结果一致。对于Bcl-2蛋白,磷酸肌酸钠1、6、12mmol/L组与对照组的FI值相比,差异无显著性(P>0.05),与RT-PCR结果一致。结论:1本实验证实一定浓度范围内,磷酸肌酸钠能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖。2磷酸肌酸钠作用于人卵巢癌SKOV3细胞后未见诱导细胞凋亡的作用,Bcl-2表达在转录水平和蛋白水平未见明显变化。3磷酸肌酸钠可阻滞人卵巢癌SKOV3细胞周期于G0/G1期,能够在转录水平和蛋白水平下调CyclinD1的表达;推测细胞周期阻滞可能是其抑制SKOV3细胞增殖的机制之一。4本实验证实磷酸肌酸钠无促进人卵巢癌SKOV3细胞增殖的作用,从而为肿瘤患者能够应用磷酸肌酸来保护心脏提供了参考依据。