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无尾目(Anura)是脊椎动物两栖类一个较大的研究较深入的类群,目前GenBank已收录超过200种无尾目线粒体基因序列。中蛙亚目(Mesobatrachia)是无尾目中一个类群,物种种类众多,多样性强,但目前仅有21种物种的线粒体基因组被报道,研究尚不完善。齿突蟾属(Scutiger)作为中蛙亚目中一个重要的分类单元,包含物种多为稀有濒危种类,然而缺乏线粒体全基因组序列报导,对该属的分类研究造成许多困扰。基于此,本研究对齿突蟾属的物种宁陕齿突蟾(Scutiger ningshanensis)和六盘齿突蟾(Scutiger liupanensis)进行线粒体基因组测序并分析,以期为齿突蟾属及相关物种的分类学研究进一步提供分子研究证据。研究采用PCR技术,结合引物步移法及基因组步移法进行产物测序,利用生物信息学手段对测得的片段进行拼接、注释和分析,结合NCBI数据库中已收录的21种中蛙亚目线粒体基因组序列信息,分别以PCGs、rRNAs、rRNAs & PCGs为数据集,以新蛙亚目的中国林蛙(Rana chensinensis)以及中国雨蛙(Hyla chinensis)为外群,采用最大简约法(Maximum Parsimony, MP)、最大似然法(Maximum Likehood, ML)和贝叶斯推论法(Bayesian Inference, BI)构建系统发育树,进行中蛙亚目各物种的系统发育关系的分析。研究主要获得如下结果：1.线粒体基因组的基因组成及排列已测出的序列中,宁陕齿突蟾的线粒体基因组序列长16,799 bp,六盘齿突蟾线粒体基因组序列长16,890 bp。推测二者均为典型的两栖类动物线粒体基因组结构,主要包括13个蛋白质基因(ATP6, ATP8, ND1-6, ND4L, COX1-3和CYTB)、2个rRNA基因(16S-rRNA和12S-rRNA)、19个tRNA基因(tRNAIle tRNAGln、 tRNAMet未测出),以及一个控制区(D-loop区)。两个物种的序列较为相似,通过比对发现,二者一致性位点占到87.6%。所测齿突蟾线粒体基因序列排列紧密,都存在重叠区和间隔区。宁陕齿突蟾基因重叠区8处,共计34bp,基因间隔区9处,共计17 bp；六盘齿突蟾基因重叠区14处,共计87bp,基因间隔区12处,共计63bp。宁陕齿突蟾和六盘齿突蟾线粒体基因组序列的碱基组成具有AT偏向性,A+T的含量大于G+C的含量。宁陕齿突蟾和六盘齿突蟾线粒体基因组13个蛋白质编码基因中以标准ATG起始密码子的蛋白基因为10个,其余蛋白编码基因均以GTG起始(ATP8.COX1、 ND6)。两物种的线粒体基因组13个蛋白编码基因包括完全终止密码子和不完全终止密码子两种。两物种所测得的线粒体基因序列编码19个tRNA基因,分布于rRNAs基因和PCGs之间。tRNA基因的二级结构中,碱基错配分别为37处和44处,均以U-G错配为主。二者的控制区均位于tRNAPro基因与tRNAphe基因之间。tRNATrp基因的位置及方向在不同物种中出现差异,预示着基因组发生基因顺序重排。两种物种的rRNA位置相对固定,且均为正向编码序列,位于H链。2.中蛙亚目线粒体碱基组成分析对23种中蛙亚目物种线粒体基因组序列核苷酸组成情况进行分析发现,所有物种均表现出明显的AT倾向性,其中碱基G的含量为最低。各组分的碱基含量,H链上A>T>C>G,L链上A>C>T>G,这种碱基组成也导致了在23种中蛙亚目动物线粒体基因组各基因分链中AT/GC-skew模式的变化。由于PCGs对于密码子的选择极度依赖碱基组成,因此进一步对PCGs进行碱基分析,发现PCGs中T的含量大于A,为蛋白质编码基因的特性,因此以碱基A或T结尾的同义密码子出现次数远高于其余同义密码子。3.中蛙亚目系统发育关系分析使用MP、ML和BI法以PCGs、rRNAs、rRNAs & PCGs三个数据集分别构建系统发育树。结果显示不支持现行的中蛙亚目分类组成,应将现行的中蛙亚目中的负子蟾科、异舌蟾科移出,归为始蛙亚目。系统发育树将中蛙亚目聚为了两个分支,与滑跖蟾科(Leiuperidae)和铃蟾科(Bombinatoridae)等共同组成始蛙亚目。其中异舌蟾科(Rhinophrynidae)及负子蟾科(Pipidae)亲缘关系较近,聚为较为原始的一类。而锄足蟾科(Pelobatidae)、角蟾科(Megophryidae)、合附蟾科(Pelodytidae)聚为另一个分支,为中蛙亚目中较为进化的类群。本研究测得的宁陕齿突蟾(S. ningshanensis)和六盘齿突蟾(S.liupanensis)聚为一支,证明之前将二者同归为西藏齿突蟾种组(Scutiger boulengeri group)的建议是正确的。