新孢子虫病(Neosporoasis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄生于犬、牛、马、羊等多种宿主动物细胞内而引起的一种原虫病。该病对牛的危害尤为严重,主要造成孕畜流产、死胎以及新生犊牛的运动神经系统疾病,给畜牧业生产造成了巨大的经济损失。本试验为研究牛新孢子虫的可溶性抗原特性,提取经纯培养的新孢子虫NC-1株虫体,将虫体经反复冻融、超声波裂解制备成粗提抗原,经过Sephadex G-200分离提纯后,应用十二烷基硫酸钠-聚炳烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹(Western blot)对新孢子虫粗提及纯化抗原进行了分析。结果表明,牛新孢子虫可溶性抗原有四条蛋白带,其分子量分别为65kDa、55kDa、36kDa、29kDa,其中特异性抗原分子量为65kDa、36kDa、29kDa。为进一步完善牛新孢子虫的血清学诊断技术,本研究应用提纯特异性抗原建立了检测牛新孢子虫抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原浓度为6.25μg/mL、被检血清稀释度为1:100、酶标二抗稀释度为1:2 000为最佳工作浓度、底物显色时间为20min。该方法不与牛布氏杆菌、弓形虫等病阳性血清发生交叉反应,具有较好的特异性;该方法与IFAT平行检测144份牛血清样本,结果表明,比IFAT试验敏感性高7%,并且ELISA检测IFAT为阳性的符合率为100%。说明间接ELISA具有敏感、特异、稳定等优点,适用于牛新孢子虫抗体的检测。