福建金柑优良种质资源的筛选及其RAPD分析

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金柑(Fortunella crassifolia)属芸香科柑桔亚科金柑属的植物,是食、药用兼观赏的多用果树,人工栽培历史悠久。福建省尤溪县素有“中国金柑之乡”之美称,目前金柑的种植、加工、销售规模颇大,已成为尤溪农业特色产业经济增长的新亮点。由于长期来尤溪县栽培金柑传统上采用实生苗,苗木繁育缺乏制度约束,育苗者未能严格选择优良种质资源育苗,有的甚至于用废弃的劣质小果育苗,造成金柑种苗良莠不齐,品质退化日益严重,很大程度上影响了尤溪金柑的市场竞争力及占有率,减缓了尤溪县金柑的产业化进程。因此如何选育出性状优良、抗病性强、品质高档的金柑新品种成为当前尤溪县发展金柑产业亟待解决的难题。有鉴于此,本文通过在对尤溪县金柑资源资料和果农自报优树汇报情况基础上,初步筛选出金柑优良单株,进行不同优良单株的生物学特性、果实性状的比较,对果品果形、色泽、果皮及整齐度等外观特性以及果重、种子数、质地、风味及可溶性固形物等品质指标进行测定,采用多目标决策分析方法,筛选出外观和品质兼优的金柑单株。同时利用RAPD技术对筛选出的金柑不同优良单株进行分子标记分析,以期从分子水平上对金柑不同优良单株进行分类鉴定,揭示其亲缘关系和遗传多样性,并结合不同优良单株的特性,筛选高品质的品种,从而提高育种效率、扩展育种目标。旨在满足金柑产区对优良金柑种苗的需求,提高尤溪金柑的质量和产量,优化尤溪县金柑产业,健全尤溪金柑种苗市场,实现尤溪金柑成为高产、高效、优质的良种持续农业样板,带动其他产业的发展,推动尤溪社会经济的综合开发进程。研究结果如下:1.初选80株外观品质兼优金柑优树中,丰产单株39株,无核单株13株,早熟单株11株,大果单株17株。经过连续3年的定期、定株观测研究得出:在丰产性状上,124号和136号表现最好,特别是124号;无核方面,以102号207号208号211号表现最好;大果方面,以113号和125号表现最好;成熟期方面,以101号和211号表现最好。2.不同复选金柑优树的果实性状存在较大差异。102号金柑不仅种子少,而且风味、单果重、产量等较为理想,为产区推广首选品种。125号成熟期明显比其它品种要早5-17天,风味较好,是理想的早熟品种。207号和209号果皮光滑,油胞小而少,甜度较高,口味甜而无酸,改变了尤溪金柑的风味,适合部分喜甜厌酸人们的口味,且成熟期较早,可适量发展和推广。211号虽无核,且甜度也很高,风味浓,但果个小,产量低,有待进一步遗传改良。3.不同决选金柑优树的综合评定值差异明显。102号金柑的综合评定值最高,效用值达0.7289,比最低的208号6高0.3009,211号效用值为0.716为第二高,然后依次是113号、209号、124号、125号、101号、207号、136号及208号。4.筛选出适合于金柑总DNA提取的改进CTAB法II,即在常规CTAB法基础上,采取先破碎细胞,离心除去细胞质中大量影响DNA提取质量的次生代谢物,收集细胞核,再加核裂解液释放DNA,经分离纯化,收获DNA的两步策略。5.筛选并建立适合于金柑RAPD分析的扩增体系,即在20μL总反应体积中,含Mg2+ 2.5 mmol·L-1、dNTP 0.25 mmol·L-1、引物0.30μmol·L-1、模板DNA 1.0 ng·μL-1和1U的Taq DNA聚合酶。6.不同金柑优良单株的遗传多态性较高。筛选所得的17个引物共扩增检测到152个位点,其中63个为多态位点,多态位点比率占41.45%。金柑24个优良单株间的欧氏距离值为2.623.4,其中样株234与样株235的距离值最小,样株011与样株031的距离值最大,表明金柑24个不同优良单株间的遗传分化比较明显。
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