心肌肌钙蛋白Ⅰ抗体制备及检测方法的探讨

来源 :吉林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qifasoft2009
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心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)具有高度心肌特异性,研究表明cTnⅠ在胎儿及健康或疾病状态的成人骨骼肌中不表达,因而是心肌细胞损伤的特异性诊断指标,通过检测血清cTnⅠ能及时发现心肌梗塞。要研究探讨cTnⅠ检测方法,首先要制备cTnⅠ抗体,其次是用发光或显色物质标记抗原或抗体,最后建立检测方法。以cTnⅠ--BSA为抗原,免疫新西兰兔,制备抗cTnⅠ多克隆抗体,用BSA作为配体,采用膜渗滤亲和层析法除去与BSA有交叉反应的抗体,制备特异性抗cTnⅠ多克隆抗体。由于心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)和骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ(sTnⅠ)的氨基酸序列有60%相同,用常规方法制备的抗cTnⅠ多克隆抗体与sTnⅠ有交叉反应,失去特异性。用sTnⅠ作为配体,再次采用膜渗滤亲和层析法制备特异性抗cTnⅠ多克隆抗体。使用水溶性量子点(QDs)标记cTnⅠ,制备了cTnⅠ-QDs。标记后的cTnⅠ仍能与抗cTnⅠ多克隆抗体特异性结合。基于上述研究我们采用竞争抑制免疫分析的原理首次建立了量子点标记的竞争免疫分析法。这是我们在研究cTnⅠ抗体和量子点标记方法的基础上首次创建的一种检测cTnⅠ的新方法。
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