论文部分内容阅读
与大部分其他类型的微生物相比,微生物芽孢通常认为对灭菌处理更有抗性。萎缩芽孢杆菌适合作为指示微生物用于检验干热、环氧乙烷、微波以及电热灭菌效果。由于其芽孢抗性,萎缩芽孢杆菌芽孢用于制作灭菌生物指示剂。至今,萎缩芽孢杆菌研究重点在于其芽孢应用,而对萎缩芽孢杆菌的检测方法严重缺少。本文对萎缩芽孢杆菌生理、生化以及分子方面全面研究,意在制定出萎缩芽孢杆菌检测方法,为萎缩芽孢杆菌的应用奠定基础。本文选择了9种芽孢杆菌进行研究,其中萎缩芽孢杆菌ATCC9372作为标准菌株,在此基础上制定萎缩芽孢杆菌检测方法。第一,对萎缩芽孢杆菌ATCC9372的表观特征进行观察,配制出一种酪氨酸培养基,萎缩芽孢杆菌ATCC9372能在其培养基上产生黑色素,而其它供试菌株不产生黑色素,选择酪氨酸培养基作为萎缩芽孢杆菌的初步鉴定手段。此外,进行API50CHB试剂条对供试菌株进行鉴定,结果萎缩芽孢杆菌未能成功鉴定。观察供试菌株对7%NaCl生长、氧化酶试验、硝酸盐还原、淀粉水解、甘油利用、明胶液化、甘露糖利用、甘露醇利用、阿拉伯糖利用以及苦杏仁苷利用实验结果,通过比较,制定萎缩芽孢杆菌ATCC9372生化谱。根据萎缩芽孢杆菌ATCC9372生理生化特征,制定萎缩芽孢杆菌生理生化鉴定方法。第二,从微生物分子方面研究萎缩芽孢杆菌ATCC9372特性,选择通用引物和RecA引物对供试菌株进行PCR实验,同时对萎缩芽孢杆菌扩增片段进行测序。结果表明,RecA引物PCR实验对萎缩芽孢杆菌鉴定具有特异性,最终确定RecA引物为特异性引物,其PCR实验作为萎缩芽孢杆菌分子鉴定方法。文中提出2种DNA提取方法。一种为水煮法,一种为DNA试剂盒提取法。同时设立一对对照组。以此,优化萎缩芽孢杆菌分子鉴定法,使得实验结果更加准确、高效。第三,对制定的萎缩芽孢杆菌检测方法进行方法验证。一方面从市场上购买了4种品牌萎缩芽孢杆菌菌片,通过制定的鉴定方法进行验证,证实4种品牌菌片内含菌均为萎缩芽孢杆菌,说明制定的萎缩芽孢杆菌鉴定方法可靠、准确；另一方面选择环境水样,检测环境水样中的萎缩芽孢杆菌,通过2种萎缩芽孢杆菌检测方法检测,得出萎缩芽孢杆菌浓度,且2种方法结果一致,方法有效、可行。第四,初步探讨利用加标回收率、精确度等相关指标对萎缩芽孢杆菌检测方法进行评价。总而言之,本文成功制定了2种萎缩芽孢杆菌检测方法。