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鹿茸是梅花鹿第二显著性征,具有周期性再生的特性。在它生长最旺盛时期,其生长速度可达到2cm/d。已有的研究表明:鹿茸的再生是一个基于鹿茸干细胞代谢且受多种因子调控的复杂过程,此外有大量研究报道IGF1R基因参与多种细胞的增殖与代谢。然而,IGF1R基因在鹿茸软骨细胞的研究鲜有报道,因此本试验旨在从鹿茸软骨细胞生长、增殖、周期和凋亡的角度探究IGF1R的功能,为进一步深入研究鹿茸生长发育分子机理提供新的观点。本试验采用RNAi技术干扰鹿茸软骨细胞IGF1R m RNA的表达,从不同角度分析其对软骨细胞的影响。本研究以RNAi-Ready p SIREN-Retro QZs Green plasmid为载体,以IGF1R作为候选基因研究其对鹿茸软骨细胞生长的调控机制,成功构建了2个RNAi重组质粒,分别命名为psh RNA-1和psh RNA-2,用于转染软骨细胞。利用Real-Time PCR和Western blot技术,对转染48h后的RNAi效果进行分析。研究IGF1R对鹿茸软骨细胞增殖、凋亡及自身m RNA和蛋白表达的调控,进一步探讨鹿茸生长调节机制。研究内容和结果如下:(1)转染软骨细胞48h,相比阴性对照组,软骨细胞经psh RNA-1和psh RNA-2处理,IGF1R基因m RNA表达量分别为51%和75%;蛋白质的表达量也有明显下降。表明干扰细胞效果明显。(2)采用CCK-8方法检测转染24h、48h和72h后细胞增殖情况。相比于阴性对照组,试验组的细胞增殖呈下降趋势,尤其是psh RNA-1质粒干扰效果明显((1.09±0.10 vs 1.16±0.09(P<0.01),1.04±0.02 vs 1.10±0.06(P<0.05),0.79±0.06 vs1.01±0.07(P<0.01))。(3)转染软骨细胞48h,相比于阴性对照组psh RNA-negative,试验组细胞更多的处于G1期(79.47±0.11vs 82.27±0.35(P<0.01)),而S期细胞数量显著下降(16.56±0.10 vs 14.82±0.014(P<0.05))。(4)转染软骨细胞48h后,试验组psh RNA-1和阴性对照组psh RNA-negative的早期凋亡水平分别为(22.12±2.72%vs 8.56±0.16%,P<0.01);正常活细胞分别为(62.85±5.97 vs 77.39±4.46,P<0.05)。相关凋亡基因p53(P<0.01)、bcl-2(P<0.05)和bax的表达水平显著下降(P<0.01)。表明转染psh RNA-1可促进软骨细胞的凋亡。结果表明,IGFR对鹿茸的生长可能具有一定的调控作用,特别是对鹿茸软骨细胞的增殖和凋亡具有显著的调控作用,此外IGFR还可能通过调控软骨细胞的细胞周期调节其生长发育。