随着我国人民生活水平的提高，人口老龄化日趋严重，老年病发病率随之升高。抗衰老药物对预防机体生理功能的退化、防治老年性疾病具有重要意义。淫羊藿苷是中药淫羊藿的有效成分之一，目前已发现它具有广泛的药理学活性。衰老模型是研究衰老机理及筛选延缓衰老药物的主要手段，而衰老模型的评估和衰老相关性疾病的预测都需要有可靠的衰老的生物学标志。本研究中，我们从细胞和分子水平对淫羊藿苷抗衰老的机制作了进一步探讨。在体内外D-半乳糖致衰老模型中，对胞膜窖蛋白cav-l和昼夜节律的变化进行了研究，与广泛应用的衰老的生物学标志如衰老相关的β-半乳糖苷酶染色、SOD活力、衰老相关蛋白p53、p21、p16的表达等进行了比较，为确定新的衰老的生物标志物奠定了基础。　　 本研究首先对所建立的D-半乳糖致小鼠衰老模型中的生化指标、组织内衰老相关蛋白p53、p21、p16的表达进行了检测，并对cav-1蛋白的表达与上述指标进行了比较。结果表明，D-半乳糖致模型组脑和肝中SOD活力下降和MDA含量升高的同时，组织中p53和p21蛋白表达升高，胞膜窖蛋白cav-1的表达也升高。在体外实验中，我们在过氧化氢和D-半乳糖致细胞衰老的模型中比较了cav-1与衰老表型和衰老相关蛋白表达的一致性，结果表明，D-半乳糖可导致体外分离培养的鼠原代成纤维细胞、人胚肺成纤维细胞、人胚肝细胞出现衰老样表型，SA-β-gal染色阳性率明显升高，同时检测到细胞内活性氧自由基升高。免疫印迹结果显示D-半乳糖致衰老细胞中衰老相关蛋白p53、p21、p16蛋白表达升高、cav-1表达升高。HaCaT细胞经D-半乳糖处理后SA-β-gal染色阳性率升高，p16表达上调但p53、cav-1表达降低，出现衰老样表型的时间延长。　　 本文对淫羊藿苷抗细胞衰老的机制进行了探讨，同时检测了药物作用后细胞内cav-1的表达变化，为cav-1作为衰老标志物的研究提供依据。MTT结果显示Ica在100μmol/L以下浓度不影响正常细胞增殖；在HEL细胞中，10-20μmol/LIca预处理能对叔丁基过氧化氢和D-半乳糖所致的细胞损伤起到保护作用，与5-10μmol/L白藜芦醇的效果相当。20μmol/LIca预处理能有效降低由过氧化氢或D-半乳糖所致的衰老染色阳性率。并能抑制细胞内活性氧自由基的产生。但在HaCaT细胞中，Ica未表现出对叔丁基过氧化氢和D-半乳糖所致的细胞损伤的保护作用，可能与cav-1的基础表达量和细胞受氧化应激刺激后激活的衰老通路有关。　　 昼夜节律是指周期约为24h的节律性变化，在体内是由昼夜钟控制的。前人的研究表明，在老年个体和衰老细胞中昼夜节律会发生不同程度的改变，这是许多老年性疾病的发病原因之一。为了对衰老模型中的生物标志物进行探索，本文用PCR方法检测了体外培养的正常细胞中昼夜钟基因的表达。随着代龄的增加，CLOCK和Rev-erbα的昼夜表达节律表现出振幅减小、节律不规则等变化。　　 综上所述，本研究结果表明，淫羊藿苷在细胞水平上具有抗衰老的作用，可降低细胞内ROS水平并下调p53表达。Cav-1在D-半乳糖致衰老的体内外模型中均与p53和p21的表达相一致；昼夜节律会随细胞代龄的增加而发生改变，二者具有衰老的生物标志物的特征。