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背景食管癌（esophageal cancer,EC）是常见的消化道恶性肿瘤之一,食管癌组织学分为食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）（简称食管鳞癌）和食管腺癌,其中食管鳞癌占90%以上。Diaphanous related formin 3（DIAPH3）属于Diaphanous相关蛋白（diaphanous related formin,DRF/DIAPH）家族成员之一,定位于13号染色体长臂（13q21.2）。据报道,DIAPH3在许多肿瘤中都发挥着重要的作用,而在食管鳞癌中的功能作用及分子机制尚不清楚。本实验将研究DIAPH3在食管鳞癌增殖、迁移和侵袭中的作用及相关的分子机制。目的探究DIAPH3在食管鳞癌组织中的表达;以ECA109、ECA9706、KYSE150、KYSE180食管鳞癌细胞株为对象,探究DIAPH3对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及相关分子机制的研究。方法1.通过基因表达谱分析（gene expression profiling interactive analysis,GEPIA）和肿瘤基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库分析食管鳞癌组织中DIAPH3在m RNA水平的表达情况。2.通过免疫组织化学染色法（immunohistochemistry,IHC）检测分析食管鳞癌组织中DIAPH3的表达,并分析DIAPH3的表达与相关临床病理特征的相关性。利用蛋白质免疫印记法（Western blot）实验检测8对新鲜食管鳞癌组织及配对癌旁组织中DIAPH3蛋白质的表达情况。3.通过实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,q PCR）和Western blot方法检测食管鳞癌细胞中DIAPH3 m RNA和蛋白质的表达情况。构建DIAPH3干扰/过表达细胞株并进行效率验证。4.利用Linked Omics数据库进行基因富集分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）。利用CCK-8、流式细胞术、划痕愈合和Transwell侵袭实验检测干扰/过表达DIAPH3对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。5.通过Western blot实验检测干扰/过表达DIAPH3对食管鳞癌细胞EMT重要标记物及细胞周期蛋白D1（cyclin D1）蛋白质的表达情况。结果1.GEPIA和TCGA数据库分析得出结果:食管鳞癌组织中DIAPH3 m RNA的表达量显著高于癌旁组织（P＜0.05）。2.IHC实验结果显示:DIAPH3主要定位于细胞质中,染色强阳性,呈棕黄色,食管鳞癌组织中DIAPH3的阳性率高于癌旁组织（P＜0.05）。Western blot实验结果显示:食管鳞癌组织中DIAPH3蛋白质表达量显著高于配对癌旁组织（P＜0.05）。3.q PCR和Western blot实验结果显示:食管鳞癌细胞中DIAPH3 m RNA和蛋白质的表达量从高到低分别是:KYSE150、KYSE180、ECA9706、ECA109,并成功构建DIAPH3干扰/过表达细胞株（P＜0.05）。4.CCK-8实验结果表明:干扰DIAPH3组食管鳞癌细胞增殖速度显著慢于对照组,过表达DIAPH3组食管鳞癌细胞增殖速度显著快于对照组（P＜0.05）。5.Linked Omics数据库进行GSEA分析结果显示:DIAPH3与细胞周期（cell cycle）相关（P＜0.05）。Western blot实验结果显示:干扰DIAPH3组食管鳞癌细胞cyclin D1表达量显著低于对照组,过表达DIAPH3组食管鳞癌细胞cyclin D1表达量显著高于对照组（P＜0.05）。流式细胞术实验结果显示:干扰DIAPH3组食管鳞癌细胞凋亡率明显高于对照组,过表达DIAPH3组食管鳞癌细胞凋亡率明显低于对照组（P＜0.05）。6.划痕愈合和Transwell侵袭实验结果显示:干扰DIAPH3组食管鳞癌细胞迁移率和穿过小室的细胞数目显著低于对照组（P＜0.05）;过表达DIAPH3组食管鳞癌细胞迁移率和穿过小室的细胞数目明显高于对照组（P＜0.05）。7.Western blot实验结果显示:干扰DIAPH3组食管鳞癌细胞中E-钙黏着蛋白（E-cadherin）表达量明显高于对照组,且波形蛋白（Vimentin）表达量明显低于对照组（P＜0.05）;过表达DIAPH3组食管鳞癌细胞中E-cadherin表达量明显低于对照组,且Vimentin表达量明显高于对照组（P＜0.05）。结论1.DIAPH3在食管鳞癌组织中表达显著上升,其表达水平与肿瘤分化程度和有无淋巴结转移密切相关,与肿瘤大小、年龄和性别无关。2.DIAPH3通过增强cyclin D1的表达促进食管鳞癌细胞增殖,DIAPH3通过EMT进程促进食管鳞癌细胞迁移和侵袭。