【摘 要】
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该文研究了两株具有代表性的纤维素分解真菌拟康氏木霉S-38和微紫青霉As3.510外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因的转录、调控及其在体外无细胞系统中的表达.应用RT-PCR技术检测了
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该文研究了两株具有代表性的纤维素分解真菌拟康氏木霉S-38和微紫青霉As3.510外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因的转录、调控及其在体外无细胞系统中的表达.应用RT-PCR技术检测了葡萄糖(低、高浓度)、槐糖和纤维素等3种不同碳源培养条件下S-38和As3.510 cbh1,cbh2 mRNA的转录.通过扩增得到S-38和As3.510 cbh1启动子上约284bp和215bp的两个片段,同时,制备了来自槐糖和葡萄糖培养条件下的细胞提取物.利用带有T 7 RNA聚合酶启动子的表达载体pGEM-3Z和微紫青霉CBHⅠcDNA基因构建了重组质粒pGEM-3Zc,同时又利用PCR扩增得到带有T7启动子的DNA<,cbhl>片段.然后,分别以pGEM-3Zc DNA和扩增的DNA<,cbhl>为转录-翻译模板,首次在体外兔网织红细胞裂解液中成功表达了CBHⅠ,其分子量大小于42-61kDa之间,与预期大小(57kDa)基本一致.
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