基于GNPs-SiNRs试纸条的大田软海绵酸快速检测技术研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:rossh
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腹泻性贝类毒素(DSP)是全世界分布最广泛的海洋赤潮毒素,其主要成分为大田软海绵酸(OA)及其衍生物。贝类等海洋生物滤食有毒藻类后,DSP便在生物体内富集。若人类食用了这种经贝类毒素污染的海洋生物后,会出现如腹泻、恶心、呕吐等腹泻性贝毒综合症状。DSP毒素毒性强,中毒症状明显,且毒素热稳定性强,煮沸也难以去除,为了保障消费者的生命安全,需要研究一种灵敏、快速的现场检测方法以实现对DSP的有效监控。免疫试纸条生物传感器正逐渐被广泛应用于各类毒素的快速筛查。与其他检测方法相比,免疫试纸条生物传感器具有以下优点:不需复杂的样品预处理过程,结果直观并且可视化,信号响应时间短以及仪器设备可小型化等。本论文主要研究以毒素抗体做为生物识别元素,同时结合增敏型的纳米复合材料作为生物标记物,构建基于纳米复合材料的免疫试纸条生物传感器,采用竞争法识别机理,实现了对腹泻性贝类毒素(大田软海绵酸)的高灵敏的检测研究。同时,利用所构建的毒素识别平台,对市场上销售的部分贝类产品进行贝毒污染的测试。本论文的主要内容包括:(1)研究制备胶体金-纳米二氧化硅(GNPs-SiNRs)复合材料,通过比较胶体金的表面覆盖率和负载量,以及比较纳米复合物在水溶液中的稳定性(是否容易聚沉),选择最佳的胶体金-纳米二氧化硅作为抗体标记物,采用物理吸附方法实现抗体在纳米复合材料表面的固定化。构建基于纳米复合材料材料的免疫试纸条生物传感器,同时对传感器的工作条件进行优化(GNPs-SiNRs与抗体结合的最适pH值、GNPs-SiNRs中加入抗体的量等),用以降低非特异性吸附,提高检测灵敏度。(2)研究检测试纸条传感器的分析检测性能,并实现了对贝类实际样品的高灵敏的检测。在最优试验条件下(GNPs-SiNRs与抗体结合的最适pH为9.0、GNPs-SiNRs中抗体浓度为1 μg/mL等),试纸条响应信号的强度与目标毒素标准品的浓度在15.5-100 ng/mL范围内有良好的线性关系,检测限为15.5 ng/mL。该试纸条在常温下保存1个月后,对目标毒素的响应信号的变化为10%以内,表现出了良好的重现性和稳定性;该试纸条对于其他非目标毒素(如黄曲霉毒素、石房蛤毒素等)并没有明显的响应信号的变化,展现了其良好的特异性。在贝类实际样品的检测中,试纸条响应信号的强度与复杂基质中的目标毒素浓度在16.8~100 ng/mL范围内有良好的线性关系,检测限为16.8 ng/mL,其结果与标准品的检测结果类似,说明该试纸条在复杂基质的环境中仍然对目标毒素保持良好的选择性,并且受其他干扰较小。同时,将试纸条对实际样品的检测结果与小鼠生物法检测结果进行对比,表现出了比较好的一致性。
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