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目的 茶多酚(Tea Polyphenols,TP)是从茶叶中提取的多酚类物质,是茶叶中的主要活性成分。大量的实验研究表明茶多酚是一种天然抗氧化剂,具有较强的抗氧化性。低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)在体内外都可被氧化修饰成氧化型LDL(Oxidized low density lipoprotein,ox-LDL),研究表明ox-LDL具有细胞毒性作用,且能促进泡沫细胞形成,认为是动脉粥样硬化发生的始动因子。体内外研究都发现ox-LDL的氧化应激作用所致的内皮细胞损伤是其细胞毒性的主要体现形式之一。本实验将铜离子诱导LDL氧化修饰的ox-LDL作用于人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),观察了ox-LDL对HUVEC的生长抑制作用,并通过在蛋白质水平和mRNA水平微管骨架蛋白和凋亡相关蛋白的检测和分析,探讨ox-LDL促进动脉粥样硬化发生的机制,试图寻找有效降低动脉粥样硬化发生率的干预措施,并为茶多酚的进一步广泛应用提供科学依据。 方法 首先采用铜离子诱导法将LDL氧化修饰为ox-LDL。复苏后HUVEC置于37℃,5%CO2,饱和湿度条件下培养。将处于对数生长期的HUVEC分为对照组和三个实验组:茶多酚组、ox-LDL+茶多酚组、ox-LDL组。茶多酚和ox-LDL在培养体系中的终浓度分别为25μg/ml和200μg/ml,对照组加入等体积的PBS。加入茶多酚和ox-LDL培养48h后,采用四唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法测定细胞活性、吖啶橙荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,DNA Ladder分析DNA断裂情况,分别采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)及Western blotting、免疫细胞化学方法分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax