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第一部分JAZF1在BCPAP细胞中过表达及验证目的:使用重组腺病毒载体(Adv-JAZF1-GFP)在BCPAP细胞中过表达JAZF1。方法:采用重组腺病毒分别感染BCPAP细胞,分为阴性对照组(NC组)、空载组(Adv-GFP组)、实验组(Adv-JAZF1-GFP组),转染48h后,分别提取各组细胞总RNA,逆转录合成c DNA,采用SYBR-Green I法、ABI7500、q RT-PCR二步法检测JAZF1 m RNA的表达水平,以GAPDH作为内参,用2-△△CT值表示基因相对表达量,采用q RT-PCR检测各组JAZF1 m RNA表达水平;提取各组细胞总蛋白,定量各组蛋白浓度,Western blot分别检测各组JAZF1蛋白相对表达水平。结果:重组腺病毒转染BCPAP细胞48h后,对照组与空载组比较无明显统计学差异,实验组JAZF1 m RNA以及蛋白相对表达水平较对照组、空载组均明显上调(P<0.001)。结论:成功构建JAZF1过表达BCPAP细胞株,为进一步研究JAZF1基因对甲状腺乳头状癌生物学行为的影响及相关机制的研究奠定坚实的基础。第二部分过表达JAZF1对BCPAP细胞增殖、凋亡的影响目的:观察过表达JAZF1对甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、集落形成能力以及细胞凋亡的影响。方法:完成细胞培养与转染后,MTT、克隆形成试验检测各组细胞生长及增殖能力、流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染检测各组细胞凋亡情况;提取各组细胞总蛋白并定量蛋白浓度,采用Western blot检测各组Bcl-2、Bax凋亡蛋白相对表达水平。结果:MTT结果提示:与阴性对照组、空载组比较,实验组BCPAP细胞在24h、48 h、72 h时其增殖能力明显被抑制(均P<0.01);平板克隆形成试验表明实验组克隆形成效率较NC组、空载组明显降低(均P<0.001);流式Annexin V-FITC/PI双染检测结果显示实验组细胞凋亡率(23.02±0.35%)较NC组(8.63±0.40%)、空载组(7.95±0.32%)均明显增加(均P<0.001);Western blot结果显示实验组Bcl-2表达较对照组、空载组明显下调66.0%(P<0.001),Bax表达明显上调了64.8%(P<0.001)。结论:JAZF1过表达有效抑制BCPAP细胞集落形成及细胞增殖能力,促进了细胞凋亡。第三部分过表达JAZF1对PI3K/AKT/GSK-3β信号转导通路的调控作用目的:初步探讨过表达JAZF1对甲状腺乳头状癌增殖、凋亡的可能机制。方法:转染48 h后,分别提取各组细胞总蛋白,定量各组蛋白浓度,Western blot分别检测各组PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和GSK-3β、p-GSK-3β蛋白相对表达水平。结果:Western blot实验结果发现JAZF1过表达可以抑制BCPAP细胞p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达水平(均P<0.001),能明显下调p-PI3K/t-PI3K、p-AKT/t-AKT的比值(均P<0.001);同时发现过表达JAZF1抑制p-GSK-3β蛋白相对表达水平(P<0.001),明显下调p-GSK-3β/t-GSK-3β比值(P<0.001)。结论:JAZF1通过调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路抑制BCPAP细胞增殖,促进细胞凋亡,在PTC的发展进程中可能发挥重要作用。