本研究根据微生物对营养物质的需求和厌氧菌自身的生长代谢理论,采用对比、优化试验方法,对羊梭菌病三联四防苗生产使用的产气荚膜梭菌B 型、D 型和腐败梭菌三种厌养菌进行了培养基的研究与应用试验。通过对产气荚膜梭菌B、D 型和腐败梭菌的多次培养试验,研制成功了新的厌氧产毒培养基Ⅰ和Ⅱ。厌氧产毒培养基Ⅱ可以作为上述三种细菌的通用培养基。厌氧产毒培养基Ⅰ与厌氧产毒培养基Ⅱ相比,培养产气荚膜梭菌D 型效果相同,培养产气荚膜梭菌B 型和腐败梭菌效果略差,成本略低。因此生产中可以分别配制上述培养基使用。　产气荚膜梭菌(B 型、D 型)和腐败梭菌在研制的培养基中培养,生长情况良好,产毒能力强,可达到《中华人民共和国兽用生物制品规程》(2000 年版)规定的产毒高标准。配制疫苗的免疫原性达到了《规程》规定的质量标准,疫苗成品检验全部合格。同时,测定了产气荚膜梭菌B 型、D 型和腐败梭菌在这种新研制的培养基中的生长曲线和产毒特性,从而掌握了这些细菌在新研制培养基中的生长产毒规律。结果表明,产气荚膜梭菌B 型经2h的适应期后,很快进入对数生长期,培养到8h细菌密度接近最高值,OD630 为4.329;经检测,培养4—24h 的细菌所产生的毒素(培养物上清)0.001—0.002 ml 2/2 致死KM 小鼠。产气荚膜梭菌D 型的生长速度也较快,无适应期就直接进入对数生长期,培养到12h时细菌密度最高,OD630 为1.75;细菌最佳产毒期在6—14h,培养物上清0.0005—0.00065 ml 2/2 致死KM 小鼠。腐败梭菌生长速度较慢,经6h的适应期后,才能进入对数生长期,培养到14h时细菌密度最高,OD630 为1.335;细菌毒力在培养后的6—24 h内0.01 ml 菌液可达到在24h内2/2 致死KM小鼠的效果。通过生产曲线的测定和产毒规律的探索,指导疫苗的生产培养周期。各细菌生产疫苗过程中的培养时间与《规程》规定的培养时间相比,可缩短2-10h 不等。该研制的培养基,配制方法简单,质量稳定,可重复性好,达到较高的细菌密度