目的通过观察含GTW、菟丝子黄酮药物血清对体外培养的原代大鼠睾丸生精细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响，探讨菟丝子黄酮干预GTW所致生殖损伤的作用机制。本课题为国家自然科学基金项目的一部分内容。方法体外培养大鼠睾丸生精细胞，将其分为空白组、9mgGTW组（多苷1号组）、9mgGTW+菟丝子黄酮组（黄酮1号组）、12mgGTW组（多苷2号组）、12mgGTW+菟丝子黄酮组（黄酮2号组），加不同含药血清，于培养24h、48h后，通过MTT法检测含药血清对生精细胞增殖的影响；采用流式细胞仪检测含药血清对生精细胞细胞周期及凋亡的影响。结果1生精细胞体外培养情况生精细胞附着于支持细胞表面共同生长、分化持续3周；碱性磷酸酶显色中，精原细胞表面或内部可见蓝紫色的NBT-formazan沉淀，其他细胞中未见；Feulgen染色中，生精细胞呈圆形或椭圆形，胞核大，占据整个细胞体积的90%。2含药血清对幼年大鼠睾丸生精细胞增殖的影响2.1作用24h各含药血清组相比较：（1）多苷1号组及多苷2号组OD值明显低于空白组，统计学分析具有显著差异（P＜0.05）；（2）多苷1号组OD值稍低于多苷2号组，但无明显统计学差异（P＞0.05）；（3）黄酮1号组OD值明显高于多苷1号组，统计学分析有显著差异（P＜0.05）；黄酮2号组OD值高于多苷2号组，具有统计学差异（P＜0.05）。提示菟丝子黄酮可拮抗GTW对生精细胞增殖的抑制作用。2.2作用48h各含药血清组相比较：（1）空白组OD值明显高于多苷1号组（P＜0.01）；多苷2号组OD值低于空白组（P＜0.05）；（2）黄酮1号组OD值明显高于多苷1号组，统计学分析有显著差异（P＜0.05）；黄酮2号组OD值高于多苷2号组，具有统计学差异（P＜0.05）。提示菟丝子黄酮可对抗GTW对生精细胞增殖的抑制作用。2.3各组48hOD值较24h均有不同程度的增长，其中多苷1号组和多苷2号组增长幅度较大。3含药血清对幼年大鼠睾丸生精细胞细胞周期的影响3.1在细胞倍体百分比中：（1）空白组单倍体百分比高于多苷1号组和多苷2号组（P＜0.01），而二倍体及四倍体百分比低于多苷1号组和多苷2号组，统计学分析具有显著差异（P＜0.01）。（2）多苷1号组的单倍体和二倍体百分比高于多苷2号组（P＜0.01），而四倍体百分比低于多苷2号组，无明显统计学差异（P＞0.05）。（3）黄酮1号组单倍体百分比明显高于多苷1号组（P＜0.01），其二倍体及四倍体百分比低于多苷1号组（P＜0.05）；黄酮2号组单倍体百分比高于多苷2号组（P＜0.01），其二倍体百分比低于多苷2号组（P＜0.01），四倍体百分比低于多苷2号组（P＞0.05）。提示菟丝子黄酮可以对抗GTW对大鼠睾丸生精功能的抑制作用。3.2在细胞倍体间比率中：（1）多苷1号组及多苷2号组在1C:4C和1C:2C中均明显低于空白组（P＜0.01）。（2）在1C:2C中，多苷1号组明显高于多苷2号组（P＜0.05）。黄酮1号组稍高于多苷1号组，统计学分析具有显著差异（P＜0.05），黄酮2号组明显高于多苷2号组，具有显著统计学差异（P＜0.05）。（3）在4C:2C中，各组间比较无明显统计学意义（P＞0.05）。3.3在各组间S期细胞百分数的比较中：空白组高于多苷1号组及多苷2号组（P＜0.05）；多苷1号组稍低于多苷2号组及黄酮1号组，统计学分析无显著差异（P＞0.05）；多苷2号组低于黄酮2号组，无明显统计学差异（P＞0.05）。提示GTW作用后，细胞S期生精细胞数量明显减少。4含药血清对幼年大鼠睾丸生精细胞细胞凋亡的影响与空白组相比，多苷1号组和多苷2号组细胞凋亡比率均升高（P＜0.05）；多苷1号组细胞凋亡比率稍低于多苷2号组，统计学无显著差异（P＞0.05）；黄酮1号组细胞凋亡比率稍低于多苷1号组（P＞0.05）；黄酮2号组凋亡细胞比率稍低于多苷2号组（P＞0.05）。结论1.GTW对体外培养幼鼠生精细胞有一定的影响，主要表现在生精细胞增殖能力下降，细胞凋亡增多。2.菟丝子黄酮可保护生精细胞的增殖能力；干预生精细胞的分裂周期，其干预作用可能是通过修复生精细胞S期来实现的；未发现菟丝子黄酮对生精细胞凋亡有明显的调控作用。