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自噬(Autophagy)广泛存在于真核细胞的生命活动中。在一些应激情况下,如饥饿,分化和正常的生长调控中,细胞通过发生自噬而维持机体内环境的稳态和细胞的存活。因此,自噬在细胞的正常生理、病理过程中均起到了非常重要的作用。过多或过少的自噬会对细胞产生危害,比如衰老,肿瘤,心脏病等疾病中都发现自噬活性的异常。目前,细胞自噬在肿瘤的发生、发展及治疗中的潜在作用已经成为当今生命科学领域的研究热点。
在98%的急性早幼粒细胞白血病(APL)病人中发现有PML-RARa融合蛋白的存在,它是15,17号染色体易位,导致15号染色体上的PML基因与17号染色体上的RARa基因发生融合。该融合蛋白的存在导致髓系细胞的正常发育分化受阻,是发生APL的关键因素。
我们在研究中发现融合蛋白PML-RARa表达显著增强细胞自噬活性。本课题主要从如下方面证实并阐述PML-RARa调控自噬活性这一现象并获得如下研究结果:
(1)应用透射电子显微镜,共聚焦显微镜和蛋白印迹等方法发现融合蛋白PML-RARa的转染表达显著增强多种细胞的自噬活性,该现象也存在于同系移植造病小鼠体内浸润组织的APL样白血病细胞。
(2)利用自噬特异性抑制剂3-MA发现,3-MA可以显著抑制PML-RARa诱导的细胞自噬的发生。
(3)运用溶酶体酶抑制剂Pepstatin A和E64d处理发现,PML-RARa融合蛋白表达诱导自噬活性的增加是由于自噬体形成的增多(on-rate increase),而不是由于自噬体与溶酶体融合减少或被溶酶体酶的降解减少(off-rate decrease)所致。
(4)过表达PML-RARa增加Beclin1蛋白的表达水平,但并不影响Vps34(PI3KC3)、Atg7和Grp78(ER应激诱发自噬过程的重要分子)蛋白的表达。
(5)PML-RARa融合蛋白表达诱导自噬活性增强的效应并不存在于APL其它少数变异型融合蛋白(如PLZF-RARa、NPM-RARa)表达的细胞,提示PML-RARa的表达对自噬活性的影响是该融合蛋白所特有的性质。
综合本课题的研究结果,我们的结论是,PML-RARa融合蛋白的表达能够特异性地诱导细胞自噬的发生。这将对PML-RARa的病理学机制研究提供新的知识,同时可能对认识自噬在白血病发生与发展中作用具有理论创新意义。