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目的:首先通过对石柴方中主要有效成分的提取,在此基础上用有效成分进行体外透皮和大鼠在体吸收的研究,以及体内药动学进行研究。探讨石柴方有效成分不同给药途径的吸收转运过程及体内外相关性,研究各成分相互作用规律,阐明石柴方治疗癫痫最适宜的给药途径。 方法:1.石柴方提取与纯化工艺的考察,以柴胡皂苷a(SSa)为指标,通过对AB-8大孔树脂纯化工艺的研究,对柴胡中有效成分的提取纯化工艺进行优化。以挥发油得率为指标,通过对水蒸气蒸馏法提取工艺的研究,对石菖蒲中有效成分的提取工艺进行优化。 2.石柴方体外黏膜渗透研究,选择离体牛蛙腹皮为渗透模型,采用Franz扩散池进行体外黏膜实验,测定石柴方体外黏膜渗透系数。考察不同的接收液、药物浓度及配伍后对石柴方体外黏膜渗透的影响。研究石柴方有效成分的体外转运过程。 3.石柴方在体鼻腔吸收研究,以大鼠为实验动物进行在体鼻腔吸收实验,采用鼻腔循环灌流和单向灌流的模型,HPLC测定灌流液中SSa和α-细辛脑的量,考察不同药物质量浓度、不同配伍比例对石柴方有效成分吸收的影响。研究各有效成分经鼻腔给药后的吸收特性及复方给药后吸收变化。 4.石柴方体内药动学研究,选择小鼠作为试验动物,对柴胡皂苷注射、灌胃和鼻腔给药、石柴方注射和鼻腔进行血浆药物动力学研究和脑组织药物动力学研究,比较不同给药组的Tmax、Cmax及绝对生物利用度(F),对五组的脑靶向性进行评价。比较单用柴胡皂苷和配伍后的药动学参数,探讨石菖蒲挥发油对柴胡皂苷在体内吸收的影响。结合血浆药动学及脑部药动学实验结果,以速效、高效及脑靶向为评价指标,从动物实验初步阐明石柴方的最佳给药途径。 结果:1.石柴方提取与纯化工艺的考察结果,AB-8大孔树脂纯化柴胡总皂苷的最佳工艺条件是吸附流速为1BV·h-1,洗脱溶剂为70%乙醇,用量为5BV,洗脱流速为2BV·h-1,柴胡总皂苷的含量达到60.24%。用水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油的最优提取条件:药材浸泡时间为2h,加水量为10倍,提取时间为6h,平均挥发油得率为1.37%。 2.石柴方体外黏膜渗透研究结果,研究不同接受液对石菖蒲挥发油体外黏膜渗透有显著影响,选用3%吐温生理盐水作为接收液;药液浓度与配伍柴胡皂苷后对石菖蒲挥发油的黏膜渗透无影响。石菖蒲挥发油体外黏膜渗透符合一级吸收,以被动扩散为主。而柴胡皂苷不能透过蛙皮。 3.石柴方在体鼻腔吸收研究结果,药物浓度对柴胡皂苷和石菖蒲挥发油的鼻腔吸收速率常数无显著影响,配伍后石菖蒲挥发油对柴胡皂苷的鼻腔吸收速率常数有影响,石菖蒲挥发油抑制柴胡皂苷的鼻腔吸收。但柴胡皂苷对石菖蒲挥发油的鼻腔吸收速率常数无影响。 4.石柴方体内药动学研究结果,计算出柴胡皂苷注射给药主要药动学参数:Cmax=(46854.97±953.56)ng·mL-1,Tmax=1min;柴胡皂苷鼻腔给药:Cmax=(5523.14±191.6)ng·mL-1,Tmax=10min,F=46.45%,Re=142.17%,DTI=3.06;柴胡皂苷灌胃给药:Cmax=(3142.74±88.77)ng·mL-1,Tmax=30min,F=2.07%,Re=64.60%,DTI=1.25。石柴方注射给药:Cmax=(29521.66±2147.5)ng·mL-1,Tmax=1min;石柴方鼻腔给药:Cmax=(3415.99±364.75)ng·mL-1,Tmax=10min,Re=97.76%,DTI=1.89。血药动力学研究表明,柴胡皂苷经鼻腔给药吸收迅速,生物利用度较口服高,脑药动力学研究表明,柴胡皂苷鼻腔给药后脑靶向性要高于注射组和灌胃给药组。但配伍石菖蒲挥发油后,对柴胡皂苷的鼻腔给药吸收有抑制作用。 结论:鼻腔给药作为一种特殊的给药方式,药物在鼻腔中吸收迅速,生物利用度高,脑靶向性好,能充分体现其引药入脑的优势。将柴胡皂苷制成鼻腔给药制剂,用于治疗癫痫,具有一定的可行性。若要将石柴方制成鼻腔给药制剂,可以考虑加入促渗透剂,是否有一定的可行性,有待进一步研究。而石菖蒲挥发油抑制柴胡皂苷鼻腔吸收的作用机制有待进一步深入研究。