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目的:支气管哮喘(简称哮喘)是当前世界面临的重要健康问题,其发病率和死亡率在逐年上升。目前哮喘病人气道粘液高分泌导致气道阻塞,肺功能下降,感染增加是严重哮喘发作面临的首要问题。目前哮喘气道粘液高分泌的研究主要集中在炎症介质及其相关细胞内信号的分子机制研究。在哮喘气道粘液高分泌中,非受体型酪氨酸激酶(Lyn)如何调节转录生长因子-β3/SMAD(TGF-β3/SMAD)细胞信号转导很少报道。因此本文就这方面的分子机制进行研究。方法:(1)利用gateway技术构建Lyn高表达载体,并通过脂质体转染293T细胞包装Lyn高表达慢病毒。(2)构建Human MUC5AC 启动子荧光报告基因(pGL3-hMUC5AC/-689/+48)片段。(3)细胞实验分组:用Lyn高表达病毒和非Lyn高表达病毒转染人支气管上皮细胞(16HBE),再分别用TGF-β(1,2,3)刺激两种病毒感染后的人支气管上皮细胞,PBS刺激组做对照;Lyn siRNA转染人支气管上皮细胞组和非LynsiRNA转染人支气管上皮细胞组,再分别用TGF-β(1,2,3)刺激转染后的人支气管上皮细胞,PBS刺激组作对照。(4)分别用免疫荧光,Promega的双荧光素酶报告基因,检测MUC5AC表达情况;用western blot检测β-actin,Smad2/3,pSmad2/3,Lyn蛋白的表达情况。结果:1.成功进行慢病毒包装。2.人MUC5AC 启动子荧光报告基因(pGL3-hMUC5AC/-689/+48)片段构建成功,并进行序列比对,与预计碱基序列完全一致。3.TGF-β1,TGF-p3刺激野生型(非LynsiRNA干扰或者非Lyn高表达病毒转染)人支气管上皮细胞与PBS对照组相比,能增加MUC5AC的表达和MUC5AC基因启动子的活化(P<0.05),且western blot检测Smad2/3,pSmad2/3灰度值也相应增加(P<0.05),而TGF-β2刺激野生型人支气管上皮细胞与PBS对照组相比不增加MUC5AC表达和MUC5AC基因的活化(P>0.05),且western blot检测Smad2/3,pSmad2/3灰度值和对照组无差异(P>0.05)。4.TGF-β2,TGF-β3 刺激 Lyn 缺失(LynsiRNA 干扰组)的人支气管上皮细胞,导致MUC5AC蛋白表达和MUC5AC基因启动子的活化比TGF-β32,TGF-β3刺激野生型人支气管上皮细胞MUC5AC蛋白表达和MUC5AC基因启动子的活化显著增高(P<0.05),且western blot检测Smad2/3,pSmad2/3灰度值也显著增加(P<0.05);TGF-p1刺激Lyn缺失人支气管上皮细胞能显著降低MUC5AC的表达和MUC5AC基因启动子活化(P<0.05),且western blot检测Smad2/3,pSmad2/3灰度值明显降低(P<0.05)。5.TGF-β2,TGF-β3刺激Lyn上调(Lyn高表达病毒转染)的人支气管上皮细胞,MUC5AC蛋白的表达和MUC5AC启动子基因活化比野生型显著降低(P<0.05),且western blot检测Smad2/3,pSmad2/3灰度值显著降低(P<0.05);而TGF-p1刺激Lyn上调人支气管上皮细胞不降低MUC5AC的表达及MUC5AC基因启动子的活化,并且TGF-β31刺激Lyn上调的人支气管上皮细胞,其Smad2/3,pSmad2/3的表达与TGF-β31刺激野生型16HBE差异无统计学意义。(P>0.05)。结论:1.TGF-β1,TGF-β3增加人支气管上皮细胞MUC5AC表达,TGF-β2不增加人支气管上皮细胞MUC5AC表达。2.Lyn缺失,TGF-β2和TGF-β3可显著增加人支气管上皮细胞MUC5AC表达,TGF-β1可显著降低人支气管上皮细胞MUC5AC表达。3.Lyn上调,TGF-β2,TGF-β3可降低人支气管上皮细胞MUC5AC表达,而TGF-β1不降低人支气管上皮细胞MUC5AC的表达。4.Lyn调节TGF-β刺激人支气管上皮细胞MUC5AC表达的增高或降低的具体分子调节机制可能是通过Smad2/3,pSmad2/3的上调或者下调。