目的 制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型，观察中药丹参有效成分中药单体丹参素、芍药有效成分中药单体芍药苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用，并探讨其作用机制。以期为临床寻找新的有效治疗新生儿缺氧缺血性病(HIE)的药物提供实验理论依据。 方法 1结扎新生大鼠左颈总动脉，放入缺氧装置箱，吸入92％氮气及8％氧气混合气，制备新生大鼠HIBD模型。假手术组仅切开颈部皮肤，分离左颈总动脉，不结扎动脉及不吸入低氧混合气。 2 将7日龄新生大鼠随机分成2组：①假手术组(Sham)；②缺氧缺血模型组(HIBD)。缺氧缺血后48h多聚甲醛心脏灌注，断头取脑，多聚甲醛固定，石蜡包埋。HE染色观察脑组织病理改变及脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)染色检测神经细胞凋亡。 3 将7日龄新生大鼠随机分成5组：①假手术组(Sham+Veh)，假手术后Oh腹腔注射等量生理盐水；②缺氧缺血模型组(HIBD+Veh)，缺氧缺血后0、24h腹腔注射等量生理盐水；③丹参素15mg/Kg.d，治疗组(HIBD+DSS 15mg·Kg<-1>·d<-1>)，缺氧缺血后0、24h腹腔注射丹参素15mg/Kg.d；④丹参素30 mg·Kg<-1>·d<-1>治疗组(HIBD+DSS 30mg/Kg.d)，缺氧缺血后0、24h腹腔注射丹参素30mg/Kg.d；⑤丹参素60 mg/Kg.d治疗组(HIBD9+DSS 60mg·Kg<-1>·d<-1>)，缺氧缺血后0、24h腹腔注射丹参素60mg/Kg.dHIBD+Veh组与各丹参素治疗组再分为3个时点，即再分为缺氧缺血后6h、24h、48h亚组，每亚组6只大鼠。 4 Sham+Veh组新生大鼠于假手术后6h，HIBDq+Veh及各HIBD+DSS组分别于缺氧缺血(HI)6h、24h、48h断头取脑。制备脑匀浆，比色法黄嘌呤氧化酶法测定鼠脑匀浆SOD活性，改良的硫代巴比妥酸法(TBA法)测定MDA浓度水平，比色法测定NOS、iNOS活性，硝酸还原酶法测定NO浓度水平。 5 Sham+Yeh组新生大鼠于假手术后48h，HIBD+Veh及各HIBD+DSS组于缺氧缺血后48h多聚甲醛心脏灌注，断头取脑，多聚甲醛固定，石蜡包埋。HE染色观察脑组织病理改变及脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端标记法(TIJNEL)染色检测神经细胞凋亡。 6 应用以上方法行芍药苷实验，将7日龄新生大鼠随机分为假手术组(Sham+Veh)、缺氧缺血模型组(HIBD+Veh)，芍药苷5mg/Kg.d治疗组(HIBD+PF5mg/Kg.d)，芍药苷10 mg/Kg.d治疗组(HIBD+PF 10mg/Kg.d)，芍药苷20 mg/Kg.d治疗组(HIBD+PF 20mg/Kg.d)。芍药昔剂为5mg/Kg、10mg/Kg、20mg/Kg，每天一次。 结果 1新生大鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织的病理改变与脑细胞凋亡观察 Sham组大脑皮质及海马区组织无水肿、坏死，神经细胞形态正常，未出现Tunel阳性凋亡细胞。与Sham组比较，HIBD组新生大鼠大脑皮层及海马区组织水肿，细胞周围间隙增宽，胞体肿胀变圆，变大，胞浆染色变浅；Tunel染色阳性凋亡细胞较多。 2 结扎新生大鼠左颈总动脉并在缺氧条件下脑组织生化指标的改变 1．1 与Sham+Veh组比较，HIBD+Veh组新生大鼠经缺氧缺血造模后6h、24h、48h，大脑组织中SOD活性降低，MDA水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。 1．2 与sham+Veh组比较，HIBD+Veh组新生大鼠大脑中iNOS在缺氧缺血后6h时变化不大，差异无统计学意义(P>0.05)；而在缺氧缺血24h、48h时升高，差异有统计学意义(P<0.05)。 1．3 与Sham+’Veh组比较，HIBD+Veh组NOS及NO在缺氧缺血后6h、24h、48h均升高，差异有统计学意义(P<0.05)。 2 丹参素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用 2．1各剂量HIBD+DSS组新生大鼠在缺氧缺血造模后6h、24h、48h，大脑组织中SOD活性较HIBD+Veh组相应时点回升，MDA水平回降，且呈一定的剂量效应。差异有统计学意义(P<0.05)。 2．2各剂量HIBD+DSS组新生大鼠在缺氧缺血造模后6h时，大脑组织中iNOS较HIBD+Veh组相应时点变化不大，差异无统计学意义(P>0.05)；而在缺氧缺血24h、48h时，各剂量HIBD+DSS组新生大鼠大脑组织中iNOS较HIBD+Veh组相应时点回降，且呈现一定的量效关系，差异有统计学意义(P<0.05)。 2．3各剂量HIBD+DSS组新生大鼠在缺氧缺血造模后6h、24h、48h，大脑组织中NOS、NO较HIBD+Veh组相应时点回降，且呈现一定的量效关系，差异有统计学意义(P<0.05)。 2．4与HIBD+Veh组比较，各剂量HIBD+DSS组新生大鼠病理损伤减轻，凋亡细胞减少，且呈一定的剂量效应，差异有统计学意义(P<0.05)。 3 芍药苷对新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用 3．1 各剂量HIBD+PF组新生大鼠在缺氧缺血造模后6h、24h、48h，大脑组织中SOD活性较HIBD+Veh组相应时点回升，MDA水平水平回降，且呈一定的剂量效应。差异有统计学意义(P<0.05)。 3．2 各剂量HIBD+PF组新生大鼠在缺氧缺血造模后6h时，大脑组织中iNOS较HIBD+Veh组相应时点变化不大，差异无统计学意义(P>0.05)；而在缺氧缺血24h、48h，时各剂量HIBD+PF组新生大鼠大脑组织中iNOS较HIBD+Veh组相应时点回降，且呈现一定的量效关系，差异有统计学意义(P<0.05)。 3．3 各剂量HIBD+PF组新生大鼠在缺氧缺血造模后6h、24h、48h，大脑组织中NOS、NO较HIBD+Veh组相应时点回降，且呈现一定的量效关系，差异有统计学意义(P<0.05)。 3．4 各剂量HIBD+PF组新生大鼠与HIBD+Veh组比较病理损伤减轻，凋亡细胞减少，且呈一定的剂量效应，差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 1缺氧缺血可导致新生大鼠以脑细胞凋亡为形态学特征的脑损伤。其可能机制为缺氧缺血导致新生大鼠缺氧缺血早期脑nNOS产生增多，缺氧缺血后期脑iNOS产生增多，两者产生的过高的NO有促脑细胞凋亡，从而起损害脑的作用；另外新生大鼠缺氧缺血后氧自由基损伤及脂质过氧化可能也与脑细胞凋亡有关。 2 丹参素具有抑制脑细胞凋亡，从而起脑保护作用。其机制可能与其在缺氧缺血早期抑制nNOS产生，在缺氧缺血后期抑制iNOS产生，从而抑制有害的过高的NO生成，以及抗脂质过氧化，抗自由基损伤，打断一系列恶性循环等有关。 3 芍药苷对缺氧缺血脑损伤时的脑神经细胞凋亡也有抑制作用，其机制可能与其通过抗氧化，抑制nNOS、iNOS的产生，抑制过高的有毒的NO的产生，从而抑制脑神经细胞凋亡有关。