基于SCF/c-kit信号通路观察芪黄煎剂对胃切除后小肠运动的影响

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1目的通过对中药芪黄煎剂(Qi Huang Decoction,QH)的高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)进行测定,揭示QH对SCF/c-kit信号通路的药效物质基础。再建立Wistar大鼠胃切除动物模型,滴注QH于小肠内进行干预,观察QH对大鼠胃切除后肠道功能恢复情况的影响,以及SCF/c-kit信号通路在其中的作用,初步探讨QH对胃切除后肠道功能恢复的作用机制。2方法2.1本实验采用HPLC技术构建不同批次芪黄煎剂的指纹图谱,获取相应共有峰数据信息,采用“相似度评价软件(2004A)”处理分析。2.2参照我们以前成熟的胃切除手术方案建立大鼠模型方法,总共60只大鼠随机分为对照组,标准肠内营养组(EN),标准肠内营养+芪黄煎剂组(EN+QH)以及标准肠内营养+芪黄煎剂组+c-kit抑制剂组(AG-1296)(EN+QH+AG-1296)。空白对照组不作任何处理,自由饮水进食,不给予肠内营养和中药。假手术组仅给予腹部正中切开后缝合,不行胃切除。手术后自由饮水进食,不给予肠内营养和中药。其它三组均行胃切除手术,均给予标准肠内营养,EN+QH组再给予10g/(kg.d)的芪黄煎剂,EN+QH+AG-1296组在EN+QH组的基础上再给予10mg/kg/d的AG-1296。治疗结束后检测大鼠小肠电生理及推进率,ELISA测定血清SCF含量,取大鼠小肠分离肌层,通过间接免疫荧光分析SCF和c-kit双阳性细胞(ICC)的数目及分布;通过荧光定量PCR和Western blot检测不同组大鼠小肠SCF和c-kit m RNA及蛋白的表达水平。3结果3.1芪黄煎剂药物分析结果表明,10副药之间成分及药效无差异,其水溶性主要成分为黄芩苷。3.2显示芪黄煎剂能够显著改善胃切除大鼠小肠蠕动的节律性,而c-kit抑制剂AG-1296能够抑制芪黄煎剂的功能。与EN组(30.5±4.0%)相比EN+QH组(39.36±2.9%)小肠推进率显著提高(P=0.034);EN+QH+AG-1296组(24.3±1.7%)与EN+QH组相比小肠推进率显著下降(P=0.0007);与EN组相比EN+QH组血清SCF浓度提高(P=0.014);EN+QH+AG-1296组与EN+QH组相比血清SCF浓度显著下降(P<0.01);EN+QH组SCF IOD值显著高于EN(P=0.017)和EN+QH+AG-1296组(P=0.005);EN+QH组c-kit IOD值显著高于EN组(P=0.012)和EN+QH+AG-1296组(P=0.0054);EN+QH组SCF m RNA的表达水平显著高于EN组(P=0.034)和EN+QH+AG-1296组(P=0.008);EN+QH组c-kit m RNA的表达水平显著高于EN组(P=0.028)和EN+QH+AG-1296组(P=0.006);EN+QH组SCF蛋白的表达水平显著高于EN组(P=0.021)和EN+QH+AG-1296组(P=0.004);EN+QH组c-kit蛋白的表达水平显著高于EN组(P=0.033)和EN+QH+AG-1296组(P=0.005)。4结论QH质量可控。QH能够促进胃切除术后大鼠小肠运动功能的恢复,QH促进胃切除大鼠小肠功能恢复的机制可能是通过上调SCF/c-kit信号通路表达,增加ICC的数量实现的。
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