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三七-丹参药对作为临床经典活血化瘀药对,是市面所售的多种活血化瘀复方制剂的主要组成。目前以三七-丹参药对为对象的研究主要涉及体外配伍前后化学成变化、不同配比活性成分含量变化、抗血栓形成和抑制血小板聚集作用机制等方面。血瘀证相关研究中,血瘀模型的建立方法主要以“药物加环境刺激”手段为主,而外力导致外伤血瘀的研究主要围绕简单药效学和造模方法进行。因此,本课题复制了大鼠外伤血瘀模型,比较了三七-丹参药对(3:1、1:1、1:3)对大鼠血流变、伤肢肿胀及肌肉损伤的改善作用;基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术进行了三七-丹参药对活血化瘀的血浆及尿液代谢组学研究、体内化学成分及代谢产物鉴定并结合网络药理学进行三七-丹参药对活血化瘀研究。从代谢、药效物质基础及网络药理学层面探究了三七-丹参药对活血化瘀的作用机制。实验结果如下:(1)复制大鼠外伤血瘀模型,比较阳性药(活血止痛胶囊)、三七、丹参及三七-丹参药对(3:1、1:1、1:3)对外伤血瘀模型大鼠血流变、伤肢肿胀及肌肉损伤的改善作用。结果表明,与模型组相比,给予阳性药、三七、丹参、三七-丹参药对(3:1、1:1、1:3)后大鼠血液流变学指标、伤肢日腿径较初始腿径差值显著下降,伤肢肌肉组织损伤均有所恢复,且三七-丹参药对3:1治疗效果最好。(2)在代谢组学实验中,通过UPLC-Q-TOF-MS/MS技术筛选并分析外伤血瘀大鼠血浆及尿液差异代谢物及相关代谢通路,比较了阳性药、三七、丹参及三七-丹参药对(3:1、1:1、1:3)对差异代谢物的回调作用和对相关代谢通路的干预作用。结果表明,外伤血瘀造模后大鼠血浆鉴定出22个血浆差异代谢物,导致亚油酸代谢、α-亚麻酸代谢、花生四烯酸代谢、类固醇激素生物合成和丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢5条代谢通路发生紊乱(Pathway Impact>0.1);尿液中鉴定出了 12个差异代谢物,主要导致苯丙氨酸代谢、类固醇激素生物合成、戊糖和葡萄糖醛酸转化和赖氨酸降解4条代谢通路发生紊乱(Pathway Impact>0.1)。给予阳性药、三七、丹参及三七-丹参药对(3:1、1:1、1:3)后,血浆中:分别有14、11、11、17、15、13血浆差异代谢物发生回调,4、3、4、5、4、4上述血浆差异代谢物相关代谢通路被干预;尿液中:分别有9、6、6、9、8、8个尿液差异代谢物发生回调,4、2、2、4、3、2尿液相关代谢通路被干预。三七-丹参药对3:1回调血浆和尿液差异代谢物最多及调控相关代谢通路最多。(3)三七-丹参药对(3:1)的体内化学成分及代谢产物鉴定研究中,血浆中共鉴定出35个外源性成分,包括22个原型成分,13个代谢成分;尿液中共鉴定出22个外源性成分,包括原型成分13个,代谢成分9个,三七和丹参中所含皂苷类成分及丹参水溶性酚酸类成分和脂溶性丹参酮类成分可在外伤血瘀大鼠血浆和尿液中以原型及其代谢产物的形式被检出并鉴定。(4)网络药理学研究中,通过 PubChem、Swiss TargetPrediction、GeneCards、OMIM和DrugBank数据库预测并筛选了差异代谢物、体内化学成分及其代谢产物靶点与疾病靶点,并取交集。通过Cytoscape软件构建“靶蛋白-靶蛋白互作”网络,结合Metascape数据库对交集靶点进行KEGG和GO富集分析。共获得114个交集靶点,KEGG富集到173条通路,GO富集到1569个条目,其中生物过程条目1359个,细胞组成条目76个,分子功能条目134个。富集到的KEEG通路和GO功能条目涉及了花生四烯酸代谢、炎症反应、补体和凝血级联、受伤反应等血瘀相关通路或生物过程。综上,根据血液流变学、伤肢肿胀及肌肉损伤的改善效果、血浆及尿液代谢组学研究结果,发现三七-丹参药对3:1活血化瘀效果最好;外伤血瘀大鼠血浆及尿液差异代谢物、体内化学成分、代谢产物的鉴定结果及其网络药理学研究结果,初步揭示了三七-丹参活血化瘀的“成分-靶点-通路”作用网络。三七-丹参药对主要通过回调外伤血瘀差异代谢物含量及调控血瘀相关靶点干预花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、α-亚麻酸代谢等炎症相关通路,发挥活血化瘀的作用,为三七-丹参药对的临床应用及进一步开发提供了理论参考。