目的脑卒中是目前世界范围内严重危害人类健康的疾病之一，其发病率随着年龄的增加而上升，对家庭和社会造成严重的经济负担。脑卒中患者残留严重的神经功能缺损，是因为中枢神经系统损伤后轴突再生困难。传统的观点认为，中枢神经再生困难最主要的原因是因为受损神经元缺乏内源性再生的能力。但目前的观点认为，中枢神经系统病灶周围存在大量轴突再生抑制因子，这是阻碍受损神经元轴突再生的关键因素。排斥性导向分子（repulsive guidance molecule A,RGMa）是目前认为最有潜力的轴突再生抑制因子之一，可以激活细胞内信号传导分子RhoA及其效应器ROCK，使下游底物肌球蛋白轻链（myosin light chains, MLC）磷酸化水平增加，从而介导生长锥的塌陷和轴突再生抑制作用。米诺环素是一种能通过血脑屏障的四环素类抗生素，在多种急性脑缺血的动物模型中具有广谱的抗炎、抗凋亡、抗氧化及血管保护作用。在前期的临床研究中也发现，米诺环素可促进急性脑梗死患者神经功能的恢复。然而，其潜在的细胞和分子机制尚未完全阐明。本研究拟观察米诺环素是否可以通过下调缺血灶周围RGMa的表达，促进轴突再生，从而改善大鼠的神经功能，并且在体外进一步观察米诺环素是否通过MLCP/MLC信号通路促进氧糖剥夺/复氧损伤后PC12细胞神经突的生长作用。方法第一部分1.将72只清洁级健康成年雄性SD大鼠，按随机数字表法分为以下四组：假手术组，缺血再灌注组，生理盐水组及米诺环素组，各组各18只。采用线栓法闭塞大鼠右侧大脑中动脉2h制备局灶性脑缺血再灌注损伤（I/R）模型，于再灌注的同时静脉注射3mg/kg的米诺环素，每天2次，持续14天。在缺血再灌注24h后，采用伊文思蓝（EB）法检测缺血脑组织血脑屏障通透性的改变。2.再灌注2周时，采用免疫组织化学及Western Blot法检测缺血侧皮质及海马中RGMa蛋白的表达，免疫组化染色神经微丝蛋白200（NF-200）评估神经元轴突的生长。3.分别在缺血再灌注第2，7，14及28天，采用改良的神经功能缺损评分（Modified neurological severity scores，mNSS)）及Montoya楼梯实验（staircase test）评估大鼠的神经功能。第二部分1.采用氧糖剥夺/复氧（oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）模型模拟体内脑缺血再灌注损伤，体外培养的PC12细胞随机分为正常组，氧糖剥夺2，4，6，8h组和不同浓度的（0.1,1,10μM）米诺环素治疗组。在氧糖剥夺再复氧24h后采用CCK-8法测定PC12细胞的存活率。2.在氧糖剥夺再复氧24h后采用MAP-2免疫细胞荧光染色标记PC12细胞的神经突，荧光显微镜下观察神经突长度，Western blot法检测各组GAP-43蛋白的表达水平。3.体外培养的PC12细胞随机分为正常组，模型组，1μM米诺环素组和MLCP抑制剂组（1nM, Calyculin A）。在氧糖剥夺再复氧24h后采用Western blot法测定MLC及p-MLC的表达，荧光显微镜下观察神经突的长度及检测GAP-43蛋白的表达水平。结果第一部分1.缺血再灌注24h后，大鼠缺血侧脑组织有明显的EB渗出（4.40±0.73μg/g），静脉给予3mg/kg米诺环素治疗后能降低缺血侧脑组织EB的渗出量（2.71±0.68μg/g，P<0.05）。2.缺血再灌注2周后，缺血侧皮质及海马RGMa蛋白表达增加，轴突损伤严重，NF-200蛋白表达明显降低（P<0.05），而米诺环素组大鼠缺血脑组织内RGMa表达较模型组明显降低（P<0.05），NF-200蛋白表达增加（P<0.05）。3.米诺环素使大鼠缺血再灌注损伤后改良的神经功能评分（mNSS）显著下降并改善大鼠的前肢运动功能（P<0.05）。第二部分1. PC12细胞的存活率随缺氧缺糖时间的延长而逐渐降低，OGD6h时细胞存活率为(46.1±2.9)。（0.1～10μM）米诺环素呈非线性浓度依赖性提高氧糖剥夺6h后PC12细胞的存活率，其中1μM浓度作用最强（P<0.05）。2.氧糖剥夺损伤引起PC12细胞神经突回缩，米诺环素能显著促进PC12细胞氧糖剥夺损伤后神经突的生长，同时上调轴突再生蛋白GAP-43的表达（P<0.05），Calyculin A能阻断米诺环素的促进作用。此外，氧糖剥夺诱导PC12细胞MLC磷酸化水平增加，而米诺环素能显著降低PC12细胞MLC磷酸化水平（P<0.01）。结论：米诺环素能促进大鼠局灶性缺血再灌注损伤后神经功能的恢复及轴突再生相关蛋白的表达，其机制可能与下调RGMa蛋白的表达有关。米诺环素可能是通过激活MLCP/MLC信号通路调控PC12细胞内MLC磷酸化水平，促进神经突的生长。