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目的:研究牛膝留酮对大鼠原代成骨细胞及小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖及成骨细胞分化相关因子OCN、OPG、OPN、Collagen Ⅰ、ALP表达的影响,探索牛膝甾酮对成骨细胞增殖和分化的作用机制,为临床应用牛膝留酮治疗骨质疏松症提供理论依据。方法:此次研究分为七部分(1)二次酶消化法分离培养大鼠原代成骨细胞,用牛膝甾酮分别以1ng/μ l,5ng/μl,10 ng/μ l的浓度干预24h、48h,CCK-8试剂盒检测大鼠成骨细胞的增殖活性。(2)实时荧光定量PCR(qPCR)法检测上述浓度的牛膝留酮干预后24h、48h,大鼠成骨细胞的骨钙素(OCN)、骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的mRNA表达变化。(3)高浓度牛膝甾酮分别以 1ng/μ l,20ng/μ 1,50 ng/μ l,75 ng/μ l,100 ng/μ l的浓度体外干预小鼠成骨细胞系MC3T3-E1 24h、48h。CCK-8试剂盒检测MC3T3-E1细胞的增殖活性。(4)低浓度牛膝甾酮分别以 10-6ng/μ l,10-5ng/μ l,10-4ng/μ l,10-3ng/μl,10-2ng/μl,10-1ng/μ l的浓度体外干预小鼠成骨细胞系MC3T3-E1 24h、48h。CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性。(5)qPCR 法检测 10-6ng/μl,10-5ng/μ l,10-4ng/μ l,10-3ng/μ l,10-2ng/μ l,10-1ng/μ l 浓度的牛膝甾酮干预后,MC3T3-E1 细胞 OCN、OPG、OPN、Collagen Ⅰ、ALP的mRNA表达变化。(6)lng/μ l,5ng/μ l,10ng/μ l浓度的牛膝甾酮培养小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞7d,14d,AKP试剂盒检测ALP表达情况。(7)含1ng/μ l,5ng/μ l,10ng/μ l牛膝留酮的诱导液进行小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞培养,至第7、14天时分别行茜素红染色。结果:(1)牛膝留酮干预大鼠原代成骨细胞48h,1ng/μ l,5ng/μ l,10ng/μ l浓度组的CCK-8检测细胞活力的下降(P<0.05)。(2)干预大鼠原代成骨细胞24h,5ng/μ l浓度组的OCNmRNA,10ng/μ l组的OPN、OCN、OPG、Collagen Ⅰ mRNA 均增多(P<0.05)。干预 48h,1ng/μ l 组的 OPN、OCN、OPGmRNA,5ng/μ 1 和 10ng/μ 1 组的 OPN、OCN、OPG、Collagen Ⅰ mRNA 的表达明显增多,且随浓度升高而表达随之增多(P<0.05)。(3)高浓度牛膝甾酮干预MC3T3-E1细胞24h的50ng/μ l,75ng/μ l,100ng/μ l 组,以及 48h 的 20ng/μ l,50ng/μ],75ng/μ l,100ng/μl 组的细胞活力均下降(P<0.05)。(4)低浓度牛膝留酮干预MC3T3-E1细胞24h,各组的细胞活力无明显变化(P>0.05)。干预 48h,10-3ng/μ l,10-2ng/μ l,10-1ng/μ l 组的细胞活力均下降(P<0.05)。(5)低浓度的牛膝留酮干预MC3T3-E1细胞,除10-5ng/μ l、10-4ng/μ l组的OPNmRNA;10-6ng/μ l、10-5ng/μ l、10-4ng/μl、10-3ng/μl、10-2ng/μl、10-1ng/μ l组的 ALPmRNA 表达均增多(P<0.05)。10-6ng/μl、10-3ng/μl 和 10-1ng/μ1 组 OCNmRNA;10-6ng/μl、10-5ng/μl 和10-3ng/μ l 组的 OPGmRNA;10-6ng/μ l、10-5ng/μ l、10-4ng/μ l、10-3ng/μ l、10-2ng/μ l、10-1ng/μ 1 组的Collagen Ⅰ mRNA,表达均减少(P<0.05)。(6)牛膝甾酮干预MC3T3-E1细胞7d、14d,成骨诱导组,1ng/μ l,5ng/μ l,]0ng/μ l组的ALP表达均增加(P<0.05)。与成骨诱导组相比,干预7d和14d的5ng/μl,10ng/μ l组的ALP表达也均增加,其中10ng/μ 1组增加更为明显(P<0.05)。(7)茜素红染色实验结果显示牛膝甾酮干预MC3T3-E1细胞7d、14d,1ng/μ l,5ng/μ l,10ng/μ l组的AOD均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:牛膝留酮对SD大鼠原代成骨细胞及小鼠成骨细胞株MC3T3-E1存在抑制增殖的作用;但在增殖受到抑制的条件下却能明显促进大鼠原代成骨细胞的分化,有浓度依赖和时间依赖性;也可不同程度促进小鼠成骨细胞MC3T3-E1的分化矿化。故牛膝甾酮有促骨形成的作用,可能对骨质疏松症具有治疗作用。