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第一部分阳和汤对阳虚证乳腺癌的抑制作用目的:观察阳和汤对4T1乳腺癌细胞及小鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法:1.体外实验:制备阳和汤含药血清,采用阳和汤含药血清干预4T1乳腺癌细胞,绘制细胞生存曲线,观察阳和汤对4T1乳腺癌细胞的抑制作用。2.体内实验:采用腺嘌呤灌胃法复制阳虚证小鼠模型,并进行模型评价,皮下接种法复制阳虚证乳腺癌荷瘤小鼠模型,采用阳和汤及化疗药物环磷酰胺分组(空白组、阳虚组、单纯荷瘤组、阳虚荷瘤组、阳和汤+单纯荷瘤组、阳和汤+阳虚荷瘤组、阳和汤+CTX+阳虚荷瘤组)进行干预,干预完成后观察各组小鼠脾重、瘤重及抑瘤率。结果:1.阳和汤含药血清对4T1乳腺癌细胞有明显的的抑制作用且呈时间依赖性;2.阳虚造模完成以后,小鼠出现蜷缩不动、畏寒肢冷、精神萎靡、大便清稀等阳虚表现,T3、T4、ACTH值明显下降,造模成功;3.三个治疗组脾重小于模型组(P<0.05),阳和汤+CTX+阳虚荷瘤组脾重小于另外两个治疗组(P<0.05)。与阳虚荷瘤组比较,阳和汤+阳虚荷瘤组瘤重仅为其瘤重的1/2(P<0.05),且抑瘤率为52.87%,高于阳和汤+单纯荷瘤组的37.58%。结论:阳和汤对4T1乳腺癌细胞及阳虚证小鼠皮下移植瘤都表现出良好的抑制作用。第二部分阳和汤抗阳虚证乳腺癌的相关机制目的:探讨阳和汤抗阳虚证乳腺癌的相关机制方法:1.阳和汤含药血清干预4T1乳腺癌细胞72小时后,收集细胞上清液,ELISA检测VEGF、PGE2;2.将70只BABL/c小鼠分为7组,每组10只,分别为空白组、阳虚组、单纯荷瘤组、阳虚荷瘤组、阳和汤+单纯荷瘤组、阳和汤+阳虚荷瘤组、阳和汤+CTX+阳虚荷瘤组,阳和汤及化疗药物环磷酰胺分组进行干预后,流式细胞术检测小鼠脾脏中MDSC、NKT细胞及T细胞亚群的含量,RT-PCR检测脾脏中i NOS、ARG-1的表达,二氢乙锭荧光探针(DHE)检测ROS表达,Western bolt检测STAT1、p-STAT1、STAT3、p-STAT3的表达;采外周血ELISA法检测IL-6、TGF-β、IFN-γ的表达。结果:1.MDSC、NKT细胞含量各治疗组均低于阳虚荷瘤组(P<0.01),治疗组之间比较无意义(P>0.05),治疗组CD3+CD4+T细胞含量提升明显(39.75%,42.84%,39.95%),与阳虚荷瘤组比较有意义(P<0.01),CD3+CD8+T细胞含量变化不明显(P>0.05)。2.IFN-γ表达治疗组明显上调,阳和汤+阳虚荷瘤组、阳和汤+CTX+阳虚荷瘤组是阳虚荷瘤组的2倍(P<0.01),阳和汤+阳虚荷瘤组(993.06±59.93pg/ml)高于阳和汤+单纯荷瘤组(820.93±138.24pg/ml)且有统计学意义(P<0.05),IL-6、TGF-β治疗组均低于阳虚荷瘤组(P<0.05或P<0.01)。3.i NOS、ROS表达阳和汤+单纯荷瘤组与阳虚荷瘤组比较无意义(P>0.05),ARG-1三个治疗组与阳虚荷瘤组比较有显著统计学意义(P<0.01)。所有治疗组之间比较无意义(P>0.05)。4.p-STAT1/STAT1表达三个治疗组上调明显,与阳虚荷瘤组比较均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。阳和汤+阳虚荷瘤组(0.85±0.04)高于阳和汤+单纯荷瘤组(0.54±0.05),有统计学意义(P<0.05)。p-STAT3/STAT3表达三个治疗组均下调,与阳虚荷瘤组比较均有显著统计学意义(P<0.01)。治疗组之间比较无意义(P>0.05)。结论:1.阳和汤含药血清能有效抑制4T1乳腺癌细胞的增殖。2.阳和汤通过抑制MDSC的生成和激活发挥抗肿瘤作用。主要机制为下调VEGF、PGE2、IL-6、TGF-β等细胞因子的表达,从而使STAT3信号通路失活。同时也能下调MDSC下游产物i NOS、ARG-1、ROS的表达,使MDSC失去免疫抑制功能。3.阳和汤通过上调IFN-γ的表达激活STAT1,增强机体免疫应答能力,也能通过上调CD3+CD4+T淋巴细胞的表达,重塑免疫功能。