灵芝活性成分的提取工艺及抗肿瘤成分的研究

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本论文以获得赤灵芝子实体中多糖和麦角甾醇为目标,研究了二者的最佳提取工艺条件,并建立了二者的含量测定方法。这对于灵芝的质量标准的制定以及灵芝的综合利用有着重大的现实意义。经单因素和正交试验,各因素对灵芝多糖提取效果影响顺序为提取次数>提取温度>提取时间>溶剂体积,并且提取时间,提取温度以及提取次数对多糖的提取具有显著影响。确定灵芝多糖的最佳提取工艺条件为:在60倍溶剂量(v/w),90℃条件下,提取4次,每次3.5个小时。多糖的含量测定方法:采用苯酚-硫酸法,以葡萄糖为标准品,在紫外可见分光光度计上于485nm波长处测定吸光度,以吸光度值为纵坐标,葡萄糖加入量为横坐标,进行回归处理,得线性回归方程A=10.559C+0.0019(R=0.9991)。表明其在20~120μg线性关系良好。灵芝麦角甾醇提取的影响因素中,回流提取的次数影响最大,其次是回流提取的时间,最后是溶剂的用量(影响排序为:提取次数>提取时间>溶剂体积)。在本实验的考察范围内,三因素对麦角甾醇的提取都有显著影响。最佳提取工艺条件为:用10倍的溶剂量,在80℃回流状态下,提取三次,每次1.5h。麦角甾醇的含量测定方法:利用HPLC测定麦角甾醇的含量。色谱条件:色谱柱为kromasil - ODS C18(4.6×150mm;5μm);流动相为甲醇;流速1ml/min;柱温为室温25℃;检测波长282nm。以峰面积对浓度进行回归y=32767x-233.91 (R=0.9996),表明其在20~400μg线性关系良好。同时,以溶剂提取法、硅胶柱层析法以及制备HPLC等将现代化的分离手段与传统的提取方法相结合,对灵芝子实体进行了提取、分离及分析鉴定。从赤灵芝子实体的石油醚层和乙酸乙酯层共分离得到22个单体化合物,经过1H-NMR,13C-NMR方法鉴定了其中的5个单体化合物的结构。这些化合物分别是麦角甾醇(1),灵芝醇B(2),以及过氧化麦角甾醇(3),根据现有氢谱和碳谱数据推测了其它两个化合物结构。本文为了灵芝中筛选抗肿瘤活性的化合物单体,对其中的6个化合物进行了对小鼠肺腺癌LA795细胞的细胞毒作用实验。其中化合物1、化合物2和化合物3在10μg/ml浓度下对小鼠肺腺癌LA795细胞的抑制率分别为42.56%,33.51%,12.32%。
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