【摘 要】
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背景:肺动脉高压（pulmonary hypertension,PH）发病机制复杂、预后差、致死率高,肺血管重构是肺动脉高压重要的病理改变,骨形成蛋白-4（bone morphogenetic protein-4,BMP4）可促进肺血管重构,既往研究表明基质γ-羧基谷氨酸蛋白（matrix Gla protein,MGP）作为BMP4内源性的拮抗剂,该作用是否参与了肺血管重构尚不清楚。MGP在肺动
【基金项目】
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河南省自然科学基金（182300410365）；
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背景:肺动脉高压（pulmonary hypertension,PH）发病机制复杂、预后差、致死率高,肺血管重构是肺动脉高压重要的病理改变,骨形成蛋白-4（bone morphogenetic protein-4,BMP4）可促进肺血管重构,既往研究表明基质γ-羧基谷氨酸蛋白（matrix Gla protein,MGP）作为BMP4内源性的拮抗剂,该作用是否参与了肺血管重构尚不清楚。MGP在肺动脉高压发病机制中的作用尚未明确。目的:探究MGP在低氧条件下人肺动脉平滑肌细胞中的表达水平及其对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。MGP与BMP4的拮抗作用是否参与此过程。方法:1.人肺动脉平滑肌细胞（human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs）进行低氧处理（5%O2、5%CO2、90%N2）,检测不同时间节点（0h、24h、48h、72h）细胞表型的变化。分别利用CCK-8、Western blot检测HPASMCs的增殖能力,划痕实验检测HPASMCs的迁移能力。2.HPASMCs进行低氧处理后,分别利用Western blot和q PCR检测不同时间节点（0h、24h、48h、72h）BMP4、MGP的表达水平。3.分别利用siRNA、质粒转染技术,使MGP基因沉默、过表达,在低氧环境下培养24h,利用Western blot检测细胞的增殖能力,以及BMP4蛋白表达水平。结果:1.与对照组相比,低氧环境下HPASMCs的增殖能力、迁移能力增加（P＜0.05）。2.与对照组相比,随着低氧时间的增加,BMP4的蛋白表达量升高（P＜0.05）,在低氧24h时MGP蛋白的表达量降低（P＜0.05）,48h、72h时MGP蛋白的表达量随低氧时间增加而升高（P＜0.05）。与对照组相比,随着低氧时间的增加,BMP4 m RNA相对表达量升高（P＜0.05）,在低氧24h时MGP m RNA相对表达量降低（P＜0.05）,48h、72h时MGP m RNA相对表达量随低氧时间的增加而升高（P＜0.05）。通过Western blot和q PCR显示MGP和BMP4在低氧条件下HPASMCs中的表达是升高的。3.与空载体对照组相比,低氧环境下MGP过表达后PCNA蛋白表达量升高（P＜0.05）;与阴性对照组相比,低氧环境下MGP基因沉默PCNA蛋白表达量下降（P＜0.05）,结果表明MGP促进低氧条件下HPASMCs增殖。4.与空载体对照组相比,低氧环境下MGP过表达后BMP4蛋白表达量无统计学差异（P＞0.05）;与阴性对照组相比,低氧环境下MGP基因沉默,BMP4蛋白表达量下降（P＜0.05）。结果表明MGP促进HPASMCs增殖的机制并不依赖于MGP和BMP4相互拮抗的作用,提示其可能通过新的机制参与上述过程。结论:MGP促进低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖。
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