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目的:研究Oct4在人间充质干细胞和几种癌细胞中的表达及其DNA甲基化对Oct4表达调控的作用。方法:1.采用组织块法和梯度离心法分别分离UC-MSCs和BM-MSCs;2.通过成骨和成脂诱导分化实验鉴定MSCs的多向分化潜能;3.采用流式细胞术鉴定MSCs的表面抗原;4.分别采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、细胞免疫荧光(ICC)和流式细胞术(FACS)检测Oct4基因在hIPS、UC-MSCs、BM-MSCs、DU145、PC-3、MCF-7、HeLa、293T细胞内的表达;5.采用甲基化特异性PCR分析Oct4调控区域的CpG位点的甲基化状态。结果:1.采用组织块法和梯度离心分别分离了UC-MSCs和BM-MSCs;2.通过成骨和成脂诱导分化实验将MSCs诱导分化为成骨和成脂细胞,确认了MSCs具有多向分化潜能;3.采用流式细胞术鉴定了MSCs的表面抗原,结果表明MSCs阳性标记基因的表达水平均超过95%,同时阴性标记基因的表达水平均低于2%,确认了分离的MSCs;4.Real-Time PCR表明检测的细胞均能表达Oct4 mRNA;ICC和FACS实验表明检测的细胞均能表达Oct4蛋白质;5.甲基化分析发现,在Oct4转录起始位点上游的三个关键顺式调控区域内,hIPS呈现低甲基化,而MSCs呈现中度甲基化,其他所研究的细胞均处于高度甲基化;而在Oct4转录起始位点下游的一段DNA区域内(+37~+546),UC-MSCs细胞处于中度甲基化,而其他细胞(包括hIPS)均处于较高的甲基化状态。结论:1.分离的MSCs具有多向分化潜能,且能表达MSCs特异性表面标记蛋白;2.Oct4在成体干细胞和多种人癌细胞系中均可表达;3.DNA甲基化参与Oct4基因在人MSCs和癌细胞内的表达调控,且在UC-MSCs和BM-MSCs内DNA甲基化对Oct4基因的调节机制可能不同。