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利用改进的Hungate厌氧培养技术,从活性污泥中成功分纯到一株具有良好自凝集现象的产氢细菌YUAN-3。在液体培养基中YUAN-3形成较大的自凝集颗粒,直径一般为0.5~5.0mm,最大时可达到1.5cm,培养基澄清。16SrRNA基因序列表明YUAN-3与最相近的ClostridiumcellulosiAS1.1777T(纤维素梭菌,L09177)的相似性为91.8%。生理生化特征和16SrRNA基因序列分析均证实YUAN-3为新属、新种。建议分类名为Ethanoligenensharbinense,模式菌株为YUAN-3T。
YUAN-3最适产氢的温度为37℃;pH为5.0;C/N比为14;Mg2+浓400mg/L(MgCl2·6H2O);Fe2+浓度为80mg/L(FeSO4·7H2O)。在最佳产氢条件下,通过发酵罐产氢实验获知34h达到最大产氢速率27.6mmolH2/g-drycell·h,30h达到最大比产氢率2.81molH2/mol-glucose。
对二甲苯是测定YUAN-3细胞表面疏水能力(CSH)的最适有机溶剂;菌悬液浓度为0.01g/mL,且与对二甲苯体积比为1:1是适合测定YUAN-3CSH的条件。在延滞末期(14h)和衰亡初期(38h)菌细胞的疏水率比较高,分别为82.4%和85.7%。温度和pH对YUAN-3的凝集效果没有显著影响,但对CSH影响很大,可见YUAN-3的凝集机理比较复杂。YUAN-3也是一株产絮菌,其菌液可作为生物絮凝剂,絮凝率在67.0%左右。
根据YUAN-3的氢化酶基因(hydA)(DQ177326)序列设计了一组特异引物。经过优化后,确定本引物的最佳退火温度为61.0℃。对3个DGGE检验的污泥样品进行分析。证实了利用hydA特异引物RTF232/RTR382可以对复杂样品中的Ethanoligenens细菌进行快速检测。
上述结果表明,本研究分离的自凝集产氢细菌YUAN-3是未知的新菌种,该菌株具有高效产氢、凝集和絮凝能力,是一株具有多种优良性状的模式菌株。同时根据hydA基因建立了其快速检测和产氢活性分析的新方法,为其实现非固定化连续流产氢和菌种投加,提供了有效的菌种监测手段,为该菌株的实际工程应用奠定了理论基础。